中等职业卫生学校quot;学生、教师与家长quot;三位一体心理健康教育的探索.pdfVIP

中外健康文摘 2012年5月第9卷第21期 World Health Digest Medical Periodieal 论 著 1 前言 2.3在凋亡细胞检测中的应用 流式细胞技术起源于20世纪70年代初，在80年代初得到迅速 细胞凋亡主要指在特定的生理环境及病例环境下，细胞依据 的发展，并且成功制造出性能比较好的流式细胞仪。流式细胞仪 自身的程序，进行主动的、有序的死亡。细胞凋亡是细胞主动、 的操作过程简单快捷、分析准确快速、结果清晰明确，在医学实 有序的参与过程，而不是被动、无序的参与过程。细胞凋亡对机 验中得到广泛的应用。随着科学技术的不断发展，流式细胞仪在 体内环境有着非常重要的，它与众多基因的激活、调控以及表达 临床医学中将得到更深入、更广泛的应用[1]。 等多种功能有着密切的关系，不仅可以有效地维持机体内环境的 2 流式细胞仪在医学实验中的应用研究 稳定性，而且可以减少或者避免无功能细胞及衰老细胞的出现， 2.1在免疫细胞的分析中的应用 从而使机体内的细胞更好地适应其内部环境。 流式细胞仪在凋亡 流式细胞仪在免疫细胞分析中主要应用于淋巴细胞亚群的测 细胞检测中的应用主要有以下几点。 定，淋巴细胞通常可以分为NK 淋巴细胞(CD16+ 56)、B 淋巴细 2.3.1 Annex in V-FITC /PI检测凋亡 胞(CD19)以及T淋巴细胞(CD3)这三大群体；其中T细胞可以分为 正常情况下，细胞膜磷脂的分布处于不均称的状态，在膜 T抑制胞/细胞毒细胞(CD8)与辅助细胞/诱导细胞(CD4)。流式细 内表面出现带负电荷的磷脂，包括磷脂酰丝酸等，在膜外表面， 胞仪可以选择系列不相同的抗CD抗原单克隆抗体,并充分结合各 则出现中性磷脂。在早期的细胞凋亡中，磷脂酰丝酸能够从细胞 种荧光染料进行标记，荧光染料主要包括叶绿素蛋白PerCP、异 膜的内侧转移到细胞膜的表面，进而出现在细胞外的环境中。对 硫氰酸荧光素FITC、别藻蓝蛋白APC以及藻红蛋白PE等等。流 Annex in V 实施荧光素FITC 标记可以有效的检测机体内细胞 式细胞仪同时可以准确地分辨出各个不同的淋巴细胞亚群,此外还 的早期凋亡现象。在检测过程中，我们还可以实施PI和Annex in 可以对各个淋巴细胞亚群的百分数及其之间的比例进行准确地计 V 的联合使用,两者的有机结合能够有效的区分死细胞与凋亡细 算，由此可以显示出患者机体的免疫状态，或者显示出患者机体 胞。通过双参数流式细胞仪的散点图,我们可以从左下象限观察到 感染疾病的状态,比如当机体的免疫功能处于亢奋的状态时,CD4+ 活细胞,即(FITC- /PI-)，而从右上象限我们可以观察到非活细 /CD8+的比值出现显著增高的现象,当出现这种状态时，患者容 胞，也叫坏死细胞,即(FITC+ /PI+)，而从右下象限我们可以观 易出现自身免疫之类的疾病,包括系统性红斑狼疮(SLE)与类风湿 察到凋亡细胞,即(FITC+ /PI-)。 性关节炎(RA)等等；当CD4+ /CD8+ 的比值处于显著降低的现 2.3.2 实施光散射特性检测 象时，患者的机体免疫机能明显地下降,容易引发肿瘤、艾滋病、 细胞在凋亡过程中存在细胞膜皱缩、胞浆浓缩、核解聚、体 活动性肝硬化以及病毒感染等等。若患者感染HIV,则其CD4+细 积减小、凋亡小体形成等多种特征，在检验过程中，流式细胞仪可 胞会遭受大量病毒的破坏,CD4+ /CD8+ 的比值会出现小于1的 以实施前向角散射分析及侧向散角射分析，通过这些分析可以准确 现象,所以,通过流式细胞仪对CD4+ /CD8+ 的比值及CD4+T 的区分出正常的细胞与已经凋亡的细胞，一般凋亡细胞在流式细胞 细胞的绝对值进行相关的检测可以及时地掌握患者机体遭受HIV 检验中会出现侧向角散射升高以及前向角散射下降的现象。 病毒感染的状况[2]。