兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒使用说明书.doc

兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒使用说明书实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定中水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成 标准 pg/ml） 0.5ml×1瓶 3 酶板稀释液稀释液-20℃保存，但应避免反复冻融操作步骤 pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 400 pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 200 pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 100 pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 5 pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻混匀分钟甩干μl，空白孔除外。 μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应。450nm波长依序测量各孔的度（OD值）计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以，即为样品的实际浓度。 浓洗涤液会有析出，稀释时可在水浴中加温助溶乘以1．；2-8。