兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒使用说明书.doc

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兔肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒使用说明书实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定中水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。 试剂盒组成 标准 pg/ml) 0.5ml×1瓶 3 酶板稀释液稀释液-20℃保存,但应避免反复冻融操作步骤 pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 400 pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 200 pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 100 pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 5 pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻混匀分钟甩干μl,空白孔除外。 μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应。450nm波长依序测量各孔的度(OD值)计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以,即为样品的实际浓度。 浓洗涤液会有析出,稀释时可在水浴中加温助溶乘以1.;2-8。

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