病原学、免疫学及生化检测.ppt

微生物是存在于自然界中的一群体形细小、结构简单、肉眼直接看不见、必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能观察到的微小生物。 使用油镜时，需在玻片上滴加香柏油。这是因为油镜的放大倍数较高，而透镜很小，光线通过不同密度的介质物体（玻片→空气→透镜）时，部分光线会发生折射而散失，进入镜筒的光线少，视野较暗，物体观察不清。如在透镜与玻片之间滴加和玻璃折射率（n=1.52）相仿的香柏油（n=1.515），则使进入油镜的光线增多，视野亮度增强，物象清晰。 一、微生物分类 微生物虽然个体微小，但具有一定的形态结构和生理功能，所以按其结构和组成的差异分为三大类 1、非细胞型微生物：体积微小，能通过滤菌器，只能在活细胞内生长繁殖，如病毒、噬菌体； 2、原核细胞型微生物：仅有原始核，无核仁和核膜，缺乏完整的细胞器，如细菌、放线菌、支原体、衣原体； 3、真核细胞型微生物：细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，胞质内有完整的细胞器，如霉菌、酵母菌、藻类等。 二、细菌生长繁殖的条件 1、充足的营养。水、碳源、氮源、无机盐和生长因子。 2、合适的酸碱度。大多数为中性或弱碱性，即PH7.2-7.6。个别细菌在较碱性的培养基中生长良好。 3、适宜的温度。分为嗜冷菌、嗜热菌、嗜温菌。 4、必要的气体环境。主要是氧与二氧化碳。 三、细菌群体的生长繁殖分期 1、迟缓期。此期中细菌体积增大，代谢活跃但不分裂，菌数并不增多。此期长短不一，从数小时到数天不等，视菌种、菌龄与接种菌量和营养物质的不同而异。 2、对数生长或指数期。此期中细菌生长迅速，以恒定的速度进行分裂繁殖，菌数以几何级数增长，增长极快。研究细菌的性状最好选用此期的细菌。 3、稳定期。对数期后，细菌繁殖速度逐渐下降，细菌繁殖数与死亡数几近相等，活菌数保持稳定。 4、衰亡期。活菌数急剧减少。 四、细菌的染色 1、分为单染法、复染法、特殊染色法、负染色法、荧光染色体法等。 单染法：只用一种染液，可显示细菌的形态与排列，不能显示细菌的结构与染色反应的特性。 原理：由于细菌在中性环境中一般带负电荷，所以通常采用碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、番红等进行染色。这类染料解离后，染料离子带正电荷，使细菌着色。 复染法：用两种以上不同颜色的染料进行染色，除可观察细菌的形态、排列、大小外，还能将细菌染成不同的颜色。 常用的革兰氏染色法和抗酸染色法即为复染法。 2、革兰氏染色法 2.1原理：依据的是细菌的细胞壁组成成分和结构的不同，革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈现紫色。而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联少，而且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细胞被染色，再经番红复染后细胞呈红色。 2.2试剂： 2.2.1碱性染料 草酸铵结晶紫液； 2.2.2媒染剂 碘液，其作用是增强染料与菌体的亲和力，加强染料与细胞的结合； 2.2.3脱色剂 乙醇，将染料溶解，使被染色的细胞脱色。利用不同细菌对染料脱色的难易程度不同，而加以区分； 2.2.4复染液 番红溶液，目的是使经脱色的细菌重新染上另一种颜色，以便与未脱色菌进行比较。 2.3操作过程 标本经固定后，先用结晶紫染色、再加碘液媒染、然后用乙醇脱色，最后用沙黄或复红复染。 2.4意义 依据革兰氏染色可将细菌分为阳性和阴性两大类。由于阳性、阴性细胞壁等结构上的差别可造成对抗生素的敏感性不同，临床上依据此，可选择性针对用药。 2.5注意事项 2.5.1制片是染色的关键，载片要清洁，不得沾污油脂，菌株才能涂布均匀。注意初次涂片时，取菌量不应过大，以免造成菌体重叠。 2.5.2注意水流不得直接冲在涂菌处，以免将菌体冲掉。 2.5.3脱色是革兰氏染色的关键，必须掌握乙醇的脱色程度。若脱色过度则阳性菌被误染为阴性菌，而脱色不够时阴性菌被误染为阳性菌。（拉丝试验——未断裂DNA螺旋） 革兰氏染色1884年丹麦医师Gram所发明 紫色者为G＋菌，红色者为G—菌 五、细菌的培养和分离 大多数细菌可以用人工方法培养，但必须根据不同细菌采取各自适宜的条件，如无菌技术、接种和分离方法、培养基和培养条件等 1、样品处理 标本采集是否符合要求，直接影响细菌的检测结果，因此要求除粪、痰、咽拭子等标本，其他样本均应以无菌技术采集。 标本盛于无菌容器内，根据目的菌的种类采用不同的方法采集，标本采集后及时冷藏送检。 2、无菌技术 2.1细菌学检验必须随时防止污染和病原菌的扩散，为达到此目的而采取的技术就是无菌技术或无菌操作，在进行细菌培养检查过程中，无论是标本采