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实验三 薄层色谱法
实验五 中药薄层色谱法 ;1.1 概念: 薄层色谱法通常是指以吸附剂为固定相,将供试品溶液点在薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比,并可用薄层扫描仪进行扫描,用于中药的鉴别、检查或含量测定的分析方法。由于吸附剂对不同成分的吸附能力不同(或不同成分在固定相和移动相中的分配系数不同),在板上的移动速度不同,因而可以分离。;1.2 基本参数比移值(Rf)=原点到组分点中心的距离/原点至流动前沿的距离。一般Rf在0.2-0.8。;1.3 展开方法(1)上行展开,根据需要有斜上行与直立上行,展开剂从下往上展开。通常将展开剂倒入层析缸内,将点好的薄层板浸入展开剂约0.5cm,展开距离一般为10-15cm。(2)下行展开:在层析缸内,在薄层板的一端放一个盛展开剂的槽,用厚滤纸把展开剂引到薄层的上端而使展开剂向下移动。;1.3 展开方法(3)二次展开:一次展开后若两种物质不能完全分离,可把薄层从层析槽中取出挥去展开剂,再放入层析槽中,用同样的或另一种展开剂进行第二次展开,直到两种物质很好的分离。(4)双向展开:在正方形的薄层板上,若点样点在薄层板的一角,先进行一次展开,然后挥去展开剂,将薄板转90°,再将板进行二次展开(通常换另一种展开剂),第一次展开分离不彻底的几种成分经二次转换方向展开分离效果更好。;;;;;芩黄清肺散中黄芩的薄层色谱1.查找有关资料,以组为队,写一份芩黄清肺散中黄芩的薄层色谱的试验方案。2.方案做到详细、具体。3.成绩=实验方案(60%)+实验报告(40%)
;试验方案格式1.试验操作详细步骤2.预期结果3.参考文献
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;三.操作步骤供试液制备取本品粉末0.1 g,加甲醇20ml浸渍1小时,滤过,取滤液5 ml.蒸干,加水1Oml使溶解,再加盐酸l ml。置水浴上加热30分钟,立即冷却,用乙醚提取两次.每次 20ml.合并乙醚液,蒸干,残渣加氯仿溶解,使成l ml,作为供试品溶液。
;对照液制备取大黄对照药材0.lg,同法制成对照药材溶液;另取大黄酸对照品,加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。薄 层 板:硅胶G板点 样:供试液与对照药材溶液及对照品溶液分别点样4 ul
;展 开 剂:石油醚(30—60℃)一甲酸乙酯一甲酸(15:5:1)的上层溶液。(建议用移液管量取)展开方式:上行展开,展距7 cm显 色:置紫外光灯(365nm) 下检视;再置氨蒸气中熏数分钟后,日光下检视。
; 色谱识别紫外光灯(365nm)下,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的五个橙黄色荧光主斑点;在与大黄酸对照品色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点;经氨蒸气熏后,置日光下检视,斑点变为红色。
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