白僵菌侵染试验.ppt

白僵菌侵染黄粉虫试验 李 益 1、目的要求 2、白僵菌的基本特征 3、侵染过程 4、实验用具和材料 5、实验步骤 6、作业 1、目的要求 基本了解白僵菌的基本特征和侵染过程，并学习掌握白僵菌的毒力测定方法，比较不同白僵菌的不同浓度毒力大小。 2、白僵菌的基本特征 白僵菌进行形态学比较研究，白僵菌在25℃恒温箱中培养 10 d 的菌落直径达到 2.0～2．9 cm，绒状至粉状；初为白色，稍后或变成微黄色、微红色；背面微黄色。 分生孢子梗单生或轮生，后形成产孢细胞后者多为球形，有时呈瓶状的圆柱形，弯曲或正直，其顶端延伸变细且弯曲而呈“之”字形的纤维状。在弯曲处长出很短的小梗其上产生分生孢子。 3、侵染过程 a、分生孢子附着在寄主的表皮上（7h）；b、大量分生孢子萌发产生芽管和附着胞(22h)；c、菌体穿透到寄主表皮层中（28h），伴随着组织溶解（酶的机制），在穿透菌丝的附近，寄主表皮层的片层结构发生变形（机械性）；d、菌丝在表皮层内常平行于片层结构延伸，形成穿透菌丝；e、菌体从表皮层进入到皮细胞层中，随后进入血腔，并在血腔内大量增殖，寄主组织逐渐解体；f、在寄主死体内产生有活力的孢子，并可再侵染 3、侵染过程 4、实验用具和材料 实验用具： 灭菌培养皿、灭菌滤纸、无菌水、灭菌试管、灭菌镊子、微量移液枪、显微镜、恒温培养箱。 实验材料： 白僵菌 （Beauveria bassiana ）Bb-10-12 、成品白僵菌、0.1%吐温80湿润剂的0.003 mol/L KH2PO4缓冲液。 5、试验步骤 1、将-4℃保存的白僵菌25±1℃、相对湿度80%±10%下用PDA培养基扩繁培养7天左右。 2、带完全产孢后，用含0.1%吐温80湿润剂的0.003 mol/L KH2PO4缓冲液将分生孢子粉湿润、洗脱，磁力搅拌器搅拌混匀，并过滤除去菌丝和杂质。 3、用血球计数板在显微镜下计数孢子数，测出其浓度，再用无菌水分别稀释成孢子浓度梯度为109、108个/mL的悬浮液备用。 4、采用浸渍法将黄粉虫虫体浸入孢子悬浮液中1秒，对照组浸渍无菌水处理。 5、浸渍后放于灭菌滤纸上爬行尽快吸干其身上多余的悬浮液，吸干后把试虫放入培养皿中，（25±1）℃、相对湿度80%±10%饲养。 6、每个处理浓度3个重复，每个重复5头（2个浓度用虫）。 7、施药后每3d记录一次死虫数，连续调查5次。将死虫挑出保湿培养，记录僵虫数。 8、结果统计： 毒力结果记录表 将算出各处理（浓度）的校正死亡率换算成机率值，并与时间算出致死中时间（LD50）。 6、 作业 1、将实验结果整理写在实验报告上。 2、白僵菌有什么特点，侵染机理是什么？被白僵菌侵染后试虫有什么症状？ 3、用浸渍法进行白僵菌毒力测定实验，毒力大小是以什么方法进行评定？ 4、并结合自己所学知识说说真菌药剂和化学药剂有什么不同？ * * 分生孢子附着 在寄主表皮上（7h） 大量分生孢子萌发 产生芽管和附着胞(22h) 菌体穿透到 寄主表皮层中（28h）， 菌体从表皮层进入到 皮细胞层中，随后进入血腔 并在血腔内大量增殖， 寄主组织逐渐解体 在寄主死体内产生有活力 的孢子，并可再侵染 15 无菌水 对照 15 108 15 109 成品白僵菌 15 108 15 109 Bb-10-12 校正死亡率（%） 死亡率（%） 校正死亡率（%） 死亡率（%） 校正死亡率（%） 死亡率（%） 校正死亡率（%） 死亡率（%） 校正死亡率（%） 死亡率（%） 施药后15天 施药后12天 施药后9天 施药后6天 施药后3天 试虫数(头) 浓度（个孢子/mL） 药剂