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实验二、血涂片制备 WBC分类计数 要求 初步掌握血图片制备、瑞氏染色原理方法，WBC染色后形态学特点及其分类计数方法 流程图： 血液标本的采集 制作1-2张血涂片 提取白细胞 充池 WBC计数 瑞氏染色 WBC分类计数 原理： 血标本 形态特点/颜色差异 分类计数 操作： ⑴ 涂片 ⑵ 染色 ⑶ 镜下观察（低倍镜、油镜） ⑷ 计算 涂片 瑞氏染色 血涂片制备 血 涂 片制 备 推片 载玻片 血液 将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（薄） 一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明 涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号 李四 B 1 2 3 瑞氏染色机理 主要成分：碱性美兰与酸性伊红 物理吸附、化学亲和与电荷作用，复杂的机理使细胞不同部位着色不同。 瑞氏染色的原理 组成：酸性染料伊红和碱性染料美兰溶于甲醇中 酸性染料与细胞中的碱性物质，如血红蛋白，嗜酸性颗粒结合，使其染成红色 碱性染料与细胞中的酸性物质，如核染色质，嗜碱性颗，血小板等结合，使其染成蓝色。 而中性颗粒可与两者都结合，染成紫红色 【操作】 1、血涂片制备 标记 推片 干燥 2、染色 染液(I液)数滴覆盖整个血膜 滴加等量或稍多的缓冲液(II液) 流水冲洗 干燥 5-10min 血 涂 片 染色 勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和Ⅱ液充分混匀静置10分钟 直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先倒掉染液） 涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李四123 涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆盖整个血膜1分钟 干燥 染色 冲洗 瑞氏染液 盖满血涂片 1min 缓冲液 1-2倍 5-10min 晾干 干燥 3、低倍镜观察 全片浏览WBC分布与染色 4、油镜观察 一定方向顺序分类100个WBC 5、计算 各类细胞百分率 血涂片的观察 低倍镜观察 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2. 细胞分布情况 油镜下分类计数：体尾交界处。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。 李四123 外周血镜下WBC 外周血中常见细胞形态 中性粒细胞： 胞体呈圆形，胞质量丰富 胞质中含有大量细小均匀的紫红色中性颗粒 核分为2-5叶，叶间有核丝相连 嗜酸粒细胞 胞体呈圆形 胞质中充满粗大、均匀整齐、紧密排列的橘红色嗜酸性颗粒 胞核常分两叶，形似眼镜 嗜碱粒细胞 胞体呈圆形 胞质中含少量粗大、大小不均、排列不规则的紫黑色嗜碱性颗粒，常覆盖在核上，核分叶常不明显。 单核细胞 胞体呈不规则性或椭圆形 胞质量丰富，常呈毛玻璃样半透明 胞核大，形状不规则，呈椭圆形，肾形，马蹄形或不规则分叶，有时折叠卷曲，染色质细致疏松如网状 淋巴细胞 胞体呈圆形 胞质量较少，仅在和的一侧出现，染色呈天蓝色或深蓝色透明 胞浆中偶见几颗大小不等的紫红色嗜天青颗粒 胞核圆形，染色质粗糙紧密，偶见凹陷 大淋巴细胞  胞体圆形/椭圆形 胞质透明、淡蓝色 胞质内可有少量粗大、不均匀紫红色颗粒 胞核 圆/椭圆/肾形 染色质粗紧成块，深紫红色，核外缘光滑