miR-2135对P19细胞增殖及向心肌细胞分化的作用.doc

miR-2135对P19细胞增殖及向心肌细胞分化的作用 李 辉(河南省商丘市第一人民医院心血管内科二病区，河南省商丘市 476000) 引用本文：李辉. miR-2135对P19细胞增殖及向心肌细胞分化的作用[J].中国组织工程研究，2016，20(45):6814-6820. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.45.019 ORCID: 0000-0002-8966-879X(李辉) 文章快速阅读： 文题释义： P19细胞MicroRNA：是内源性的非编码的单链小RNA，它通过与靶基因mRNA 3’UTR区域结合，诱导mRNA的降解或阻止其翻译调控基因的表达。一个miRNA可以调控众多基因的表达，几个miRNA也可以组合来精细调控某个基因的表达。据推测，miRNA调控人类一半以上的基因。miRNA高度保守性与其功能重要性有着密切关系。 摘要 背景：既往研究发现，向心肌分化P19细胞中的miR-2135表达水平显著高于未分化P19细胞，但miR-2135对P19细胞增殖、向心肌细胞分化和心脏发育的影响尚不明确。 目的：探索miR-2135对P19细胞增殖及向心肌细胞分化的影响。 方法：分别以miR-2135沉默及空载质粒转染P19细胞，培养0-4 d，MTT法检测细胞增殖；培养0，24，48 h，流式细胞仪检测细胞周期。诱导两组转染的P19细胞向心肌细胞分化，诱导第0，10天，采用qRT-PCR检测P19细胞中miR-2135的表达；诱导第10天，采用蛋白免疫印迹检测心肌分化相关标志物心肌肌钙蛋白T、心房钠尿肽和心肌转录因子的表达。 结果与结论：①转染结果：转染miR-2135沉默质粒的P19细胞低表达miR-2135；②细胞增殖与周期：miR-2135沉默质粒转染P19细胞的增殖速度快于空载质粒转染P19细胞(P 0.05)，培养24，48 h的S期细胞比例明显高于空载质粒转染P19细胞(P 0.05)；③qRT-PCR检测结果：miR-2135沉默质粒转染P19细胞诱导10 d的miR-2135表达明显高于诱导0 d水平(P 0.01)；④蛋白免疫印迹检测结果：诱导 10 d，miR-2135沉默质粒转染P19细胞心肌肌钙蛋白T、心房钠尿肽和心肌转录因子的表达明显低于空载质粒转染P19细胞；⑤结果表明：miR-2135抑制P19细胞的增殖，可促进其向心肌细胞分化。 关键词： 干细胞；分化；增殖；miR-2135；P19细胞；细胞周期；先天性心脏病 主题词： 干细胞；肌细胞，心脏；微RNAs；组织工程 Effect of miR-2135 on the P19 cell proliferation and differentiation into cardiomyocytes Li Hui (Second Ward, Department of Cardiology, First People’s Hospital of Shangqiu, Shangqiu 476000, Henan Province, China) Abstract BACKGROUND: Previous studies have found that the expression level of miR-2135 in differentiated P19 cells is significantly higher than that in undifferentiated P19 cells. However, the effects of miR-2135 on P19 cell proliferation and differentiation into cardiomyocytes as well as cardiomyogenesis remain unclear. OBJECTIVE: To explore the effect of miR-2135 on P19 cell proliferation and differentiation into cardiomyocytes. METHODS: P19 cells were transferred with miR-2135 knockdown plasmid or vector plasmid. After 4 days of culture, cell proliferation was detected by MTT assay. Flow cytometry was used to detect cell cycle at 0, 24, 48 hours of culture. P19 cells in