赤藓糖醇抑制变异链球菌在牛奶中产酸的实验研究.doc

赤藓糖醇抑制变异链球菌在牛奶中产酸的实验研究 姚军1 张帆2 杨秀娟1 张佳丽1 (1．福建医科大学附属口腔医院 儿童牙科，福建福州350002； 2．福建医科大学口腔医学院 儿童牙科教研室，福建福州350004） 摘要： 目的 比较变异链球菌在不同浓度的赤藓糖醇-牛奶混合液中的产酸情况。 方法 将赤藓糖醇加入鲜牛奶中，配成质量分数2%、4%、6%、8%的赤藓糖醇-牛奶混合液，设置不加赤藓糖醇的阴性组和磷酸盐缓冲液的空白组。各组溶液灭菌后涂板检验灭菌效果，确定无菌后，向各组溶液接种变异链球菌菌悬液并厌氧培养，在培养的0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h测量各组溶液的pH值，SPSS描绘pH曲线,重复测量设计进行方差分析。 结果 0h～4h各组的pH值均急速下降，6h以后，阴性组和空白组的pH值仍继续下降，赤藓糖醇-牛奶组的pH值变化微小。方差分析结果显示，同一个实验组不同时间点溶液pH值不全相等；组别不同溶液的pH值在不同的时间点变化趋势不同；同一个时间点，不同的组别的pH值不全相等。 结论 赤藓糖醇能够有效抑制变异链球菌在牛奶中产酸，且高浓度较低浓度效果更强。 关键词：赤藓糖醇；变异链球菌；牛奶；产酸；防龋 中图法分类号：R780.2 作者简介：姚军，男，博士，副主任医师，儿童牙科，发表论文5篇，E-mail:dentyao@163.com 赤藓糖醇，又名原藻醇、赤兔草醇，化学名1,2,3,4-丁四醇，是一种带有清凉口感的填充型甜味剂。赤藓糖醇不仅拥有糖醇类产品的所有卓越功能，如防止龋齿、适宜糖尿病患者食用等特点，还独具低能量值和高耐受量的特性[1]。国内外研究[2-4]表明，赤藓糖醇能够抑制口腔内主要致龋菌-变异链球菌的生长和产酸，以及减弱变异链球菌在菌斑形成过程中的粘附能力。近些年来，牛奶受到广大消费者的青睐，尤其是儿童，牛奶已成为他们的日常饮品。而牛奶和龋病的关系也越来越受到人们的关注。本实验将赤藓糖醇与牛奶结合，比较变异链球菌在不同浓度下的赤藓糖醇-牛奶混合液中的产酸情况，以此评估赤藓糖醇加入牛奶后的防龋能力，为进一步研究和使用赤藓糖醇防龋提供实验依据。 [基金项目]：福建省医学创新课题（2012-CX-27) [通信作者]：姚军，E-mail:dentyao@163.com 1.材料和方法 1.1菌株和主要试剂 变异链球菌国际标准株ATCC25175( 四川大学华西口腔医学院龋病研究室惠赠)。 TPY液体培养基：1.5% 胰蛋白胨，0.4% 酵母提取物，1%葡萄糖，0.6% 磷酸二氢钾，0.2% 碳酸钠，0.2%氯化钠，0.2% 磷酸氢二钾，双蒸水，调节pH值到7.0，高压灭菌；TPY固体培养基：液体培养基中加入1.25%琼脂，高压灭菌。 赤藓糖醇(分子式C4H10O4，分子量122.12，保龄宝生物股份有限公司) ；木糖醇( 分子式C5H12O5，分子量152.15，天津市福晨化学试剂厂)；牛奶（福建长富鲜牛奶）。 1.2主要仪器 YQX-Ⅱ厌氧培养箱（上海新苗医疗器械制造有限公司)，SW-CJ-1FD 型超净工作台（上海力申科学仪器有限公司），Sartorius BS124S 电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），pH S-25 型酸度计( 上海盛磁仪器有限公司)，酶标仪(Heraeu，德国)，超声清洗仪(昆山超声仪器有限公司)。 1.3实验方法 （1）变异链球菌的复苏与传代 接种甘油保存的变异链球菌标准株至TPY固体培养基内，37℃厌氧(80%N2、10%CO2、10%H2)条件下复苏培养24h；取上述复苏的标准株单个菌落接种于TPY固体培养基内，相同条件下培养24 h；再取上述标准株单个菌落接种于TPY液体培养基内，相同条件下培养6h，离心，磷酸盐缓冲液将上述菌落配置成菌悬液，使用酶标仪调波长630nm时菌悬液的吸光度为1.0，待用。 (2)实验溶液的配备及灭菌 赤藓糖醇组：将0.16g、0.33g、0.51g、0.70g赤藓糖醇溶于1ml磷酸盐缓冲液（PBS）中，再加入7ml鲜牛奶，配成质量分数2%、4%、6%、8%的赤藓糖醇-牛奶混合液；阴性组：即牛奶组加入7ml牛奶，1mlPBS缓冲液；空白组：即PBS组加入8ml磷酸盐缓冲液。 鲜牛奶置于无菌血清瓶中，400W、25KHz超声震荡灭菌30min.PBS缓冲液及赤藓糖醇溶液121℃高温高压蒸汽灭菌20min. (3)实验溶液灭菌效果检验 各组溶液配备灭菌后，倍比稀释至10-3，取200μl涂于TPY培养皿，37℃厌氧(80%N2、10%CO2、10%H2)培养24h，要求无菌生长，排除牛奶