越橘属植物茎尖中期染色体制片技术体系的建立-西南大学期刊社.doc

6株越橘实生苗的染色体核型分析 林晓露西南大学 园艺园林学院，重庆 400716 摘要：以株越橘实生苗为材料，去壁低渗火焰干燥法制片后观察记录染色体数，并进行染色体核型分析。实验结果表明：所有实验材料均属2B核型。其中1号材料体细胞染色体数目为48，核型公式为2n=4x=34m+12sm(2SAT)+2T；2号材料体细胞染色体数目为48，核型公式为2n=4x=48=32m(2SAT)+10sm(2SAT)+4st+2T；3号材料体细胞染色体数目为48，核型公式为2n=4x=48=38m(2SAT)+8sm+2T；4号材料体细胞染色体数目为48，核型公式为2n=4x=48=30m(SAT)+12sm+6st；5号材料体细胞染色体数目为24，核型公式为2n=2x=24=20m+4sm(2SAT)；6号材料体细胞染色体数目为24，核型公式为2n=2x=24=16m(2SAT)+6sm+2st。 关键词：越橘；染色体；核型分析 越橘（Vaccinium L.）为杜鹃花科越橘属植物，花期一般在三至四月，采收期为6至8月，果肉细嫩，酸甜适口，有清爽宜人的香味。除了有一般水果的营养成分外，越橘还富含维生素A和花青素等特殊成分，具有抗癌的功能。1999年更在日本的抗癌食品名单上名列前茅自此其身价一跃千丈[1]。据美国农业部预测，越橘将是21世纪最具发展潜力的果树树种。在国际市场上，越橘果实作为一名优稀特高档果品供应市场，售价昂贵。 本实验室在重庆引种越橘已近十年，其中三个品种混合种植产生的部分实生苗后代生长状态良好，并在次年开花结实，这与越橘通常3～5年挂果有所不同。因此我们对这些实生苗进行染色体核型分析，以期为越橘的提供。 1 材料与方法 1.1材料 本实验材料为六株越橘实生苗，取自植物育种实验室。凭证标本现存于该实验室。 1.2染色体制片方法 实验采用去壁低渗火焰干燥法[2]进行染色体的制备。于抽芽阶段取旺盛生长的茎尖[3]，剥除外部小叶片，留芽长0.5㎝之内。用混合预处理液（0.1﹪秋水仙素：0.002mol/L8-羟基喹啉=1：1）浸泡处理材料2～3小时。去离子水洗去预处理液后，用0.075mol/LKCL低渗处理材料0.5小时。洗去低渗液后，固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）浸泡处理2～24小时。去离子水冲洗材料直至闻不到固定液气味，而后用纤维素酶和果胶酶的混合酶液[4]于25℃～28℃下浸泡处理4小时左右。以小镊子轻触材料易碎为宜。吸干酶液后用去离子水轻轻冲洗，并在去离子水中浸泡10～20分钟。吸干去离子水，用固定液浸泡材料0.5～1小时，后敲片，2%～5%Giemsa染色剂(pH6.8～7.2)染色，染液风干后进行镜检并统计染色体数目。然后选取染色体结果清晰分散良好的细胞在100倍显微镜下拍照并进行核型分析。 1.3核型分析方法 选取30个染色体分散良好的细胞计数，5个染色体形态清晰分散程度良好的中期细胞进行显微摄影。染色体相对长度、臂比及类型按照李懋学和陈瑞阳[5]的方法进行计算，并按Stebbins[6]的方法进行核型分类。2 结果与分析 2.1材料1号 1号材料染色体数目为48条（图图）。染色体长度比（最长染色体／最短染色体）为2.29。臂比（长臂／短臂）范围介于1.03～2.92之间。臂比大于2的染色体占全组染色体的20.83%。属于2B核型。核型公式为：2n=4x=34m+12sm(2SAT)+2T。其核型模式图及参数表如下（图、表）序号 相对长度（%） 臂比 (长/短） 类型 　 序号 相对长度（%） 臂比 (长/短） 类型 1 3.17 1.88 sm* 13 1.89 1.35 m 2 3.06 1.56 m 14 1.81 1.08 m 3 2.96 2.92 sm 15 1.72 2.00 sm 4 2.90 1.03 m 16 1.65 1.24 m 5 2.79 2.91 sm 17 1.65 1.08 m 6 2.71 1.24 m 18 1.61 1.20 m 7 2.54 2.92 sm 19 1.59 1.21 m 8 2.24 1.18 m 20 1.57 1.25 m 9 2.08 1.77 sm 21 1.54 ∞ T 10 2.08 1.58 m 22 1.52 1.58 m 11 2.06 1.37 m 23 1.51 1.58 m 12 1.97 1.70 m 　 24 1.38 1.33 m 2.2 材料2号 号料染色体数目为48条（图图）。染色体长度比为3.52。臂比范围介于1.05～5.81之间。臂比大于2的染色体占全组染色体的29.