微生物检验技术基础知识.ppt

四、微生物限度检查法 5.4细菌、霉菌及酵母菌检查 检查方法：平皿法和薄膜过滤法 按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数检查 四、微生物限度检查法 菌落报告规则： 细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu； 霉菌宜选取平均菌落小于100cfu的稀释级，作为菌数报告（即两位有效数字）的依据。 如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 四、微生物限度检查法 菌落报告规则示例 各稀释级（供试液1ml/皿）平均菌落计数（cfu） 菌数报告数 （cfu/ml.g） 原液 1：10 （-1） 1：102 （-2） 1：103 （-3） 1 — 64 8 2 640 2 — 420 64 8 6400 3 — 不可计 420 64 64000 4 — 0 0.5 0 ＜100 5 — — 0 0 ＜100 6 — 0 0 0 ＜10 7 0 0 0 — ＜1 例：菌数报告规则表1 四、微生物限度检查法 5.4.2薄膜过滤法 滤膜孔径不大于0.45μm，直径一般为50mm，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量不超过100ml，总冲洗量不得超过1000ml。 贴膜 菌面朝上于相应的琼脂培养基平板上培养，每种培养基至少制备一张滤膜。 阴性对照试验（不得有菌生长） 菌落报告规则 每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu，若滤膜上无菌生长，以＜1乘以稀释倍数的值报告菌数。 四、微生物限度检查法 5.5控制菌检查 供试品的控制菌检查应按已验证的方法进行，增菌培养基的实际用量同控制菌检查方法的验证。 阳性对照试验：加菌量为10～100cfu，阳性对照试验应检出相应的控制菌。 阴性对照试验：取稀释液10ml代替供试液，阴性对照应无菌生长。 按照不同的给药途径，必检的控制菌不同。 四、微生物限度检查法 不同给药途径制剂应检控制菌汇总 药品给药途径 应检控制菌 说明 局部给药制剂 金黄色葡萄球菌 所有制剂 铜绿假单胞菌 白色念珠菌 阴道给药 口服制剂 大肠埃希菌 所有品种 大肠菌群 含中药原药粉、 沙门菌 含动物组织（提取物） 给药 多途径给药制剂 同时检查各给药途径应检的控制菌 四、微生物限度检查法 5.6微生物限度检查法结果判断 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试； 供试品的细菌数、霉菌及酵母菌数其中任何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样 ，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数； 若供试品的细菌数、霉菌及酵母菌数、控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定，反之判供试品不符合规定。 谢谢大家！ 微生物检验技术基础知识 目 录 一、微生物基本介绍 二、培养基 三、菌种 四、微生物限度检查法 一、微生物基本介绍 1、微生物的定义 微生物是一些形体微小，以单细胞或简单多细胞、甚至是没有细胞结构的形式存在的低等生物的统称。 2、微生物的分类 微生物的主要分类单位：域、界、门、纲、目、科、属、种、变种、亚种（小种）、型、菌株（品系） “种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌 一、微生物基本介绍 3、微生物的特点 体形微小； 结构简单； 生长繁殖快； 种类繁多，分布广，适应性强。 包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、支原体和病毒等。 一、微生物基本介绍 4、微生物形态结构 4.1细菌 4.2真菌（包括酵母菌和霉菌） 一、微生物基本介绍 5、微生物与我们 每张人民币带细菌：900万个； 人体体表及体内存在大量的微生物； 皮肤表面：平均10万个细菌/平方厘米； 口腔“细菌种类超过500种； 肠道：微生物总量达100万亿； 一、微生物基本介绍 （未清洗的手） （凉水洗的手） （洗洁精洗后的手） （洗洁精洗后，消毒剂消毒的手） 二、培养基 1、培养基的制备 培养基的配制： 按处方配制，使用按处方生产的符合规定的脱水培养基 二、培养基 配制时注意： 不得使用结块或颜色发生改变的脱水培养基； 常用的溶剂是纯化水、蒸馏水，避免使用自来水，因其中含有氯等抗菌物质； 脱水型培养基应完全溶解于水中，再分装灭菌； 加热助溶，注意不要过度加热； 如需要添加其它组分，加入后应充分混匀； 配制用的容器最好用中性玻璃或聚乙烯容器； 配制培养基一般要在1小时内完成，如果室温高，配制时间过长，易使培养基受污染； 二、培养基 2、培养基的灭菌 已配制好的培养基最好尽快灭菌； 一般培养基采用湿热灭菌，即高压