寡核苷酸管芯片技术检测和鉴别我国不同组植原体.pdfVIP

林业科学研究 ２０１７，３０（１）：９９ １１０ Ｆｏｒｅｓｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＤＯＩ：１０．１３２７５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｌｙｋｘｙｊ．２０１７．０１．０１４ 寡核苷酸管芯片技术检测和鉴别 我国不同组植原体* ** 王圣洁，林彩丽，严东辉 ，于少帅，李 永，汪来发，朴春根， 郭民伟，淮稳霞，田国忠** （中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所，国家林业局森林保护学重点实验室，北京 １０００９１） 摘要：[目的]不同组植原体检测和鉴别的特异性探针已有报道，为了筛选出适合于我国不同组植原体检测和鉴别 的特异性探针，建立管芯片检测和鉴别植原体技术，并对我国发生的疑似植原体病害进行鉴别。[方法]通过ＰＣＲ 扩增结合管芯片杂交技术，对收集到的１５ 种植原体侵染的植物样品及其健康对照进行检测和鉴别。[结果]建立 了管芯片检测和鉴别植原体技术体系。１５ 种病害样品中，１３ 种获得显著的阳性杂交信号，并且所有的健康对照都 呈现为阴性。１３种植原体病害依１６Ｓｒ ＤＮＡ直接测序可分为１６Ｓｒ 、 、 、ＸＩＸ 四组植原体。在所有探针中，植原 Ⅰ Ⅱ Ⅴ 体的通用探针（Ｐｐ-５０２）可以检测到所有确定的植原体样品。１６Ｓｒ 组特异性探针（Ｐｐ -４６５）可以确定 １６Ｓｒ 组的 Ⅰ Ⅰ Ⅰ 泡桐丛枝、苦楝丛枝、桑树萎缩和莴苣黄化４种植原体样品。１６ＳｒＩＩ组特异性探针（Ｐｐ -６２９）仅可以确定 １６Ｓｒ ＩＩ组 Ⅱ 的花生丛枝、甘薯丛枝和臭矢菜丛枝３ 种植原体样品。但 １６ＳｒＶ组的枣疯病、樱桃致死黄化和重阳木丛枝及 １６Ｓｒ ＸＩＸ组的板栗黄化皱缩植原体与其他组专化性探针皆有明显的交叉杂交信号。相比于ＰＣＲ扩增的凝胶电泳检测， 管芯片检测的灵敏度提高了１ ０００ 倍。对疑似植原体病害的诊断结果显示河南濮阳的红花槐丛枝的病原应为 １６ＳｒＶ组植原体，福建福州的长春花黄化丛枝应为１６Ｓｒ 组植原体；而北京戒台寺牡丹黄化皱叶和内蒙古包头柳树 Ⅰ 丛枝未出现任何植原体专化的杂交信号。[结论]管芯片杂交技术作为一种检测和鉴别植原体的方法，可应用于我 国植原体病害调查和诊断，并为植原体的鉴别和分类提供可靠的依据。 关键词：管芯片；植原体；病害鉴定与诊断；１６Ｓｒ ＤＮＡ基因 中图分类号：Ｓ７６３．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１-１４９８（２０１７）０１-００９９-１２ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｇｒｏｕｐｓ Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ Ｕｓｉｎｇ ａｎ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ｏｆＡｒｒａｙＴｕｂｅ ＷＡＮＧＳｈｅｎｇ-ｊｉｅ，ＬＩＮ Ｃａｉ-ｌｉ，ＹＡＮＤｏｎｇ-ｈｕｉ，ＹＵＳｈａｏ-ｓｈｕａｉ，ＬＩ Ｙｏｎｇ，ＷＡＮＧＬａｉ-ｆａ， ＰＩＡＯ Ｃｈｕｎ-ｇｅｎ，ＧＵＯＭｉｎ-ｗｅｉ，ＨＵＡＩ Ｗｅｎ-ｘｉａ，ＴＩＡＮ Ｇｕｏ-ｚｈｏｎｇ （Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆＦｏｒｅｓｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆＳｔａｔｅ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＦｏｒｅｓｔ Ｅｃｏｌｏｇｙ，Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：[Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ]Ｔｏ ｆ