康宁木霉AS3.2774纤维素酶CBHⅡ基因的cDNA克隆.pdfVIP

畜牧与饲料科学 Animal andFeedScience Husbandry 康宁木霉AS3．2774纤维素酶CBHII基因的cDNA克隆 刘 燕1．王瑞军2 (1．内蒙古农业大学职业技术学院，内蒙古包头014109；2．内蒙古农业大学动物科学学院，内蒙古呼和浩特010018) CBHⅡ基因序列同源性达到99．86％。 关键词：康宁木霉；CBHII；克隆 中图分类号：Q785；$815．4 文献标识码：A cDNA ofCBHIIGeneinTrichodermaAS3．2774 Cloning koningii UUYanl．WANG Rui-itin2 andTechnicalofInner ofAnimal (1．Vocational College MongoliaAgriculturalUniversity，Baotou014109，China；2．College Science，Inner 010018，China) MongoliaAgriculturaluniversity，Hohhot totalRNAofTrichodermaAS3．2774wasextractedwithRNAExtractionKitfor leaf．A of Abstract：The koningii plant pair to thecDNAof RT-PCR tothe ofTrichoderm尬 prime硌wasdesignedamplify CBHⅡgeneby accordingpublishedsequence CBHII theobtainedcDNAwasclonedintoEcoliand koningii gene(AccessionNumber：DQ504304)．and subsequenty resultshowedthatthe betweenthecDNAobtainedinthis andthe sequenced．Thesequenceanalysis sequencesimilarity study ofn证^Dder，no CBHII was99．86％． publishedsequence koningii gene Keywords：Tric幻de嗍koningii；CBHⅡ；cloning 瘤胃纤维的分解与吸收是反刍动物的重要营 隆，以期能够为下一步构建耐酸性的分泌纤维素酶 养来源之一．而瘤胃纤维水解菌是分解瘤胃纤维的 的乳酸菌一基因工程改造菌提供试验基础。 重要微生物基础。然而纤维水解菌对于pH值的变 1材料与方法 化很敏感。其最适pH值为6．2～7．0。研究证明，瘤胃1．1材料 pH值低于6．0时，纤维水解菌的生长会受到严重抑1．1．1 菌株与载体：康宁木霉AS3．2774、大肠杆菌 制。导致纤维素和半纤维素的消化率下降n圳。另一 DH50t分别购自中国农业科学院微生物研究所、 Vector购 方面，反刍动物瘤胃pH值随进食时间有着先低后 Tiangen公司：克隆载体pMDl8一Tsimple 高的周期性变化，其pH值最低值要低于6．0。据报 自Takara公司。 道，反刍动物采食后瘤胃pH值下降，一般于饲喂后 1．5。6．0h达低值…．采食8h后又有回升¨]。因而， 本培养基用于康宁木霉的培养；LB培养基，根据需 要加入终浓度为100 当瘤胃内容物的pH值低于6．2时，将严重限制发