选修三2.21细胞工程鬻鬻.ppt

动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养技术、 动物细胞核移植技术、 动物细胞融合技术、 生产单克隆抗体技术 一、动物细胞培养 概念:就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞，然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 3、动物细胞培养过程中几个重要的概念 1. 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 2. 接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 定义： 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程） 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 细胞间的成分主要是蛋白质。胃蛋白酶适宜的PH约为2，当PH6时，胃蛋白酶就会失去活性，而胰蛋白酶作用的适宜环境PH为7.2----8.4，多数动物细胞培养的适宜PH为7.2----7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。 2.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。  动物细胞特点？ 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性 根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达? 1. 概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 1、定义：指用自然或人工方法使两个或多个动物细胞融合成一个细胞的过程。 1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点. 2、用于治疗疾病和运载药物： 主要用于癌症治疗。 生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。） 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 选修3专题2 细胞工程 一、动物细胞融合 动物细胞融合也称为细胞杂交。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞。 处理方法 诱导手段 结果 理论基础 改变 _________，产生新性状 相同 培养杂交细胞，生产_________ 杂种细胞经组织培养后获得_________ 不同 结果 用胰蛋白酶或 _________ 处理使细胞分散后诱导 细胞融合 用纤维素酶 和_______去除细胞壁后，诱导 原生质体融合 不同 处理 方法 生物法( _________ ) 不同 物理法(离心 振动 电激 等) 化学法 ( _______ ) 相同 诱导 手段 细胞的_______ 植物细胞的______性 不同 细胞膜的流动性 相同 理论 基础 动物细胞融合 植物体细胞杂交 1.2 动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较 全能 增殖 聚乙二醇PEG 灭活的病毒 果胶酶 胶原蛋白酶 细胞产品 杂种植物 遗传物质 抗体由什么细胞产生的？ 获得抗体的传统方法是什么？有何缺陷？ 二、单克隆抗体 如何才能让B淋巴细胞产生单一大量抗体？ 产量低、纯度低、特异性差 问题2 问题3 问题1 单 克 隆 抗 体 克隆 一个 B淋巴细胞 细胞群 抗体 2.1 传统抗体与单克隆抗体 ②特点：产量低、特异性差、纯度低、反应不够灵敏 常规抗体制备 一个B淋巴细胞：只分泌一种特异性抗体 单克隆抗体 杂交瘤细胞 小鼠骨髓瘤细胞：能无限增殖 融合 单克隆抗体 培养 ①向动物体内反复注射抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分离所需抗体。 过程： 抗原 小鼠 效应B细胞 骨髓