.分离以尿素为氮源的微生物.ppt

一.实验目的、原理 使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）； 利用指示剂颜色的变化检知脲酶所催化的反应。 1.配制培养基 尿素培养基（25mL） 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 2g 4.涂布分离 4.涂布分离 5.培养观察 2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？ 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与SO42-等离子形成化合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。 4、与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落 ？ 表明能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占极少数。 * 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 尿素又称脲,是蛋白质的降解产物,哺乳动物的尿液中含有,植物不能直接吸收尿素,因此,大量尿素的存在对环境造成污染.有些细菌可产生脲酶,以尿素为氮源,将尿素分解为氨,被植物吸收. 二、实验中涉及到的一些问题： （一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题） （二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？ （三）统计微生物的数量可用哪些方法？ 松软，腐殖质丰富的土壤 碳源、尿素（唯一氮源）、无机盐、水、酚红 涂布分离法、血细胞计数板 能用蛋白胨吗？ 三、操作步骤： ２、倒平板 ３、制备一定浓度梯度的细菌悬液： ４、涂布分离法分离细菌 １、制备无菌的ＬＢ全营养固体培养基和尿素固体培养基 ５、培养观察（倒置，３７ ℃ ） （无菌，0.1ml，玻璃刮刀） 稀释时尽量只取悬液 LB培养基（25mL） 蛋白胨： 0.25g 酵母提取物： 0.12g NaCl： 0.25g 琼脂糖： 0.5g 对照组 灭菌？ 实验组 G6玻璃砂漏斗过滤尿素溶液，其它成分混合后500g/cm2、90℃高压蒸汽灭菌30分钟 琼脂是含氮的未纯化的混合物，琼脂糖不含氮 每个稀释度设计1个LB对照平板 每个稀释度设计3个尿素平板（平行重复组） 菌落数 组别 稀释度 2.倒平板 3.配置细菌悬液 10-4 10-5 LB培养基 尿素培养基 10-4 10-5 涂布前后玻璃刮刀需要怎样处理？ 同一浓度捆成一摞 恒温培养箱 倒置，３７ ℃ 实验组结果示意图 能分解尿素的细菌菌落 原因：以尿素为氮源的细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解为氨，氨为碱性，酚红在酸性环境里呈黄色，碱性里呈红色。 有脲酶的细菌菌落周围有着色的环带出现 在该培养基上生长的菌落也可能有少量固氮微生物 思考题： *