10免疫标记技术,3节荧光免疫技术.ppt

第四节 应用 自身抗体检测 抗核抗体(均质型) 抗核抗体(核膜型) 抗核抗体(斑点型) 一、荧光抗体技术的应用 临床应用 病原体检测 寄生虫（猴胚肾细胞内弓形虫） 荧光抗体技术的应用 细菌（藤黄微球菌 ) 荧光免疫技术可用于淋巴细胞表面CD抗原、抗原受体、补体受体、Fc受体等的检测以及淋巴细胞及其亚群的鉴定和计数。 荧光抗体技术的应用 细胞表面抗原和受体检测 其他：如免疫病理、肿瘤等检测 肿瘤抗原（人肝癌细胞） 荧光抗体技术的应用 第三节 时间分辨荧光免疫测定 （time resolved fluoro-immunoassay, TRFIA） 时间分辨荧光免疫检测系统 第三节 时间分辨荧光免疫测定 （time resolved fluoro-immunoassay, TRFIA） 用镧系元素标记抗原或抗体，并与时间分辨技术相结合而建立的一种新型超微量物质免疫分析方法，具有灵敏度高、特异性强、发光稳定、自然荧光干扰少、标准曲线范围宽等特点，已在临床实验中广泛应用。 AgEu3＋/AbEu3＋+ Ag/Ab 检测 一、基本原理 AgEu3＋-Ab/AbEu3＋-Ag ?Ab/Ag 荧光寿命长：10μs-1000μs，时间差— 时间分辨 Stokes位移大：270nm，易分辨 时间分辨 短寿命 荧光 长寿命 荧光 Eu3+元素的stokes位移 二、方法类型 1 2 3 双抗体 夹心法 固相抗体 竞争法 固相抗原 竞争法 Eu 增强液 激发 Eu 固相Ab 待检Ag Eu标记Ab 每一步均需洗涤 Eu解离发光 双抗体夹心法 增强液 激发 固相Ab Ag？ AgEu3+ 荧光强度 与待检抗原含量 成负相关 固相抗体竞争法 增强液 激发 固相Ag Ag？ AbEu3+ 荧光强度 与待检抗原含量 成负相关 固相抗原竞争法 三、方法评价 灵敏度高：最小检出量10-18mol/L 分析范围宽：4～5个数量级 标记物稳定：有效使用期长 测量快速，易自动化 易受污染，本底增高 四、临床应用 广泛用于微量或超微量物质的检测，如各种激素（肽类激素、甲状腺激素、类固醇激素等）、蛋白质、酶、药物、肿瘤标记物及病毒抗原等的测定。 第四节 荧光偏振免疫测定 （fluorescence polarization immunoassay, FPIA） 荧光偏振免疫测定是利用抗原抗体竞争反应原理，根据荧光素标记抗原与其抗原抗体复合物之间荧光偏振程度的差异，测定液体中小分子物质的含量。 一、基本原理 荧光物质经激发光照射后，可发出偏振荧光，其强弱程度与荧光分子的大小呈正相关 荧光素标记的小分子抗原（AgF）偏振荧光弱；而形成的AgF-Ab分子增大，偏振荧光强 反应体系中待测Ag与AgF竞争结合已知抗体，故待测Ag越多，形成AgF -Ab越少，游离AgF多，故待检Ag含量与偏振荧光强度成反比 （一）FPIA原理 荧光偏振免疫测定示意图 二、方法评价 荧光素标记试剂稳定，使用寿命长重 复性好 快速，易自动化 适于小、中等分子物质检测 仪器设备昂贵，试剂盒专属性强 灵敏度较非均相荧光免疫测定法低 三、临床应用 主要用于测定小分子抗原物质，是临床药物浓度测定的首选方法，目前已有多种药物、激素、毒品和常规生化项目可以用本方法进行分析，如环孢素、苯妥英钠、卡马西平、地高辛、丙戊酸、苯巴比妥、氨茶碱及鸦片浓度等测定。 第五节 免疫芯片技术 （immunochip） 也称抗体芯片，属于蛋白质芯片的一种，是将抗原抗体结合反应的特异性与电子芯片高密度集成原理相结合而建立的一种全新概念的生物芯片检测技术。 一、基本原理 免疫芯片是将几个、几十个，甚至几万个或更多数量的抗原（或抗体）高密度排列在固相载体上，形成高密度抗原或抗体的微点阵。与患者的少量待检样品或生物标本同时进行特异性免疫反应，可一次获得芯片中所有已知抗原（或抗体）的检测结果。 （一）FPIA原理 免疫芯片检测示意图 二、方法类型 1 2 3 液体 芯片 抗体 芯片 细胞 芯片 三、关键技术 芯片阵列项目合理组合 阵列所需抗体库的合理组合 微阵列抗体或抗原固化 抗原抗体在同一张芯片的集中 用荧光等标记免疫技术等显示结果 生物样品信息的获取和分析 四、方法评价 基于高密度抗原或抗体的微阵列技 高通量取得生物信息 信息量大、快速、及时、操作简便 所需样品量少、生产成本低、用途广泛 自动化程度高等优点。 五、临床应用 免疫芯片在临床分子诊断学和许多疾病诊断方面具有广泛而重要的应用价值。