1色谱-理论.ppt

高等药物分析Advanced Pharmaceutical Analysis(海翔药业班) 主讲教师：姚彤炜,吴永江 浙 江 大 学 药 学 院 2010.10～2010.11 教学进度与课程安排 第一章???色谱基础理论 概述 分类、特点与应用、发展动向 色谱理论 基本概念、塔板理论、速率理论 一、概 述 色谱法是利用物质在不同的两相中分配、吸附或其他亲和作用的差异，通过多次重复使微小的差别积累起来变成大的差异，从而使混合物中各组分达到分离 色谱技术的飞速发展已形成一门专门的科学，称为色谱学。广泛应用于各个领域，成为多组分混合物的最重要的分离分析方法 色谱法的分类 按流动相与固定相的分子聚集状态分类 气相色谱法（气-固，气-液） 液相色谱法（液-固，液-液） 超临界流体色谱（SFC） 按操作形式分类 柱色谱，平面色谱，逆流分配 按色谱过程的分离机制分类 吸附色谱（adsorption ~ ）—— 利用吸附能力的差别 分配色谱（partition ~）—— 利用分配系数的差别 分子排阻色谱（molecular exclusion ~）或称凝胶色谱法（gel ~）—— 利用被测物分子大小不同而导致渗透系数差异 离子交换色谱（ion exchange ~）—— 利用在离子交换树脂上的交换能力差别 按色谱过程的分离机制分类 亲合色谱（affinity ~）—— 将生物活性配位基（酶、辅酶，抗体等）键合到载体表面形成固定相，利用亲合力大小进行分离(专用于蛋白质等生化样品） 手性色谱（chiral ～）—— 利用手性识别原理，用于手性药物的分离分析 按色谱过程的分离机制分类 毛细管电色谱（capillary electro- ~）—— 依靠色谱与电场两种作用力，利用分配系数和电泳速度差别而分离 毛细管电泳（capillary electrophoresis）—— 以高压电场为驱动力，根据样品组分的淌度和分配系数而分离 色谱分类图 色谱法特点与应用 色谱法特点—— 具有分离、分析功能，可排除组分间的相互干扰，将组分逐个进行定性、定量。发展快，应用广。 色谱法在药物分析中应用—— 主要用于成分复杂的样品，如：制剂分析、 中成药、天然药物提取分离、合成化合物纯度、有关杂质分析、残留有机溶剂分析、残留农药分析、非法添加物、药代动力学、生物利用度，治疗药浓监测、生物制品质量分析、临床诊断、法医鉴定、蛋白质组学、代谢组学等研究。 色谱法发展方向 向自动化、联用型、人工智能化方向发展： 色谱-质/光谱联用 气相色谱-质谱（GC-MS） 高效液相-质谱（LC- MS） 超临界流体色谱-质谱 毛细管电泳-质谱 色谱-付里叶变换红外光谱 色谱-核磁共振波谱（如LC-NMR） 色谱-等离子体原子发射光谱 色谱-色谱联用 指二种色谱方法的联用，也称二维色谱法。目的是用一种色谱法补充另一种色谱法分离效果上的不足。常见的有： 气相色谱-气相色谱 高效液相-气相色谱 高效液相-高效液相 二维薄层色谱 色谱-色谱联用法可提高分离效果，获取更多的定性分析信息 气相色谱-气相色谱联用 如岛津多维气相/气质联用系统（MDGC/GCMS），采用双柱箱系统，用惰性组件连接，有效抑制组分分解和色谱峰拖尾 全二维气相色谱（GC×GC） 把分离机理不同的两根色谱柱以串联方式结合，由调制器连接。经第1色谱柱分离后的每一色谱峰，经调制器调制后再送到第2色谱柱进一步分离。 一般柱1为较长或液膜较厚的非极性柱，柱2为较短的或液膜较薄的极性柱或手性柱等。调制器将第1柱流出的组分切割成连续的小切片。每个切片再经重新聚焦后进入第2色谱柱分离，组分在第2柱的保留时间非常短，一般在1～10 秒。 检测器检测到的响应信号经数据采集软件处理后，得到三维色谱图(X轴表示的是第一维柱的保留时间，Y轴表示的是第二维柱的保留时间，Z轴表示的是色谱峰的强度)。 高效液相-高效液相联用 非手性-手性联用 正相-反相联用 在线固相萃取 非手性︱手性联用 举例色谱图 耐用性试验 第一个色谱分析中主要考察色谱峰的保留时间变化。一般二元泵的混合误差为设定值±0.5%以内，因此考察了流动相中乙腈含量的变化（?1%）对卡维地洛尔色谱峰保留时间、理论板数(3100±50)、峰宽（峰开始至结束距离0.35min左右）、拖尾因子等的影响。 测得卡维地洛尔色谱峰保留时间与流动相中乙腈含量呈线性，根据二元泵的混合误差±0.5%，卡维地洛尔色谱峰保留时间变动在2.9 ～3.1min范围，这意味着卡维地洛尔色谱峰的收集窗应控制在2.8 ～ 3.4min（实际设定值为2.7～3.7min）。经过1140 个实际样品的分析，卡维地洛尔消旋体色谱峰的平均保留时间是3.1min，