2-2+土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

——滤膜法 以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。 微生物计数 （一）空气中微生物总数的检测 （二）水中细菌总数的检测 （三）牛奶中细菌的分离与计数 （四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数 作业 创新设计《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》 185 * 需涂布多少个培养基？ 尿素分子的立体结构 （一）筛选菌株 水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) ——耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克1966年发现耐热细菌 1、实验室微生物的筛选原理（P21） 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 （一）筛选菌株 2、选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 （一）筛选菌株 加入青霉素的培养基 ——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长 不加含碳有机物的无碳培养基 ——分离自养型微生物 1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？ 碳源是葡萄糖，氮源是尿素 2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？ 有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 阅读22页本课题使用的培养基配方 （二）微生物计数 1、显微镜直接计数法 1mm 每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。　　 1mm 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少? 1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）　　 5AB×104 5A 缺点： 不能区分死菌与活菌 2、统计菌落数目——稀释涂布平板法 （二）微生物计数 平板菌落数统计注意事项 1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个； 2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数； 3、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。 某班级菌落数统计表格 第1组 第2组 第3组 第4组 1 512 165 190 95 2 568 207 177 162 3 572 178 188 1024 平均 每mL样品中活菌数 平板 组别 恰当的稀释度、正确的涂布操作是成功地统计菌落数目的关键。 （取样0.1mL,稀释倍数106） 思考1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按公式每mL样品中的菌株数=（C÷V）×M进行计算。 思考2：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？ 低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 思考3：为了增强实验结果的说服力和准确性，我们在实验设计时应该怎么做更合理？ 实例分析1 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与另外2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 想一想：哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ （三）实验基本原则 1、平行重复原则 实例分析2 想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异 如此之大，请分析原因可能有哪些？ ① ② 实例分析2 想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除 上述两个可能影响实验结果的因素吗？ 一种方案： 可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验。 如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 实例分析 想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除 上述两个可能影响实验结果的因素吗？ 另一种方案： 　 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的！ 实例启示 设置对照实验的目的是什么？ 排