第10章 食品安全检测技术.ppt

免疫标记技术 放射物标记技术 酶标技术 免疫荧光技术 其他标记技术 酶联免疫吸附技术 酶免疫组化技术 双抗体夹心法 竞 争 法 双抗原夹心法 间 接 法 双位一点法 ELISA在食品污染物检测中的应用主要集中在以下几方面 (1)真菌毒素的检测 （1977年， LaWell首次采用了ELISA法来检测黄曲霉毒素）。 近十几年来国内外用于生物毒素检测的ELISA方法得到迅速发展，已有多种ELISA诊断试剂盒用于分析不同的毒素。可检测的真菌毒素有黄曲霉毒素B1、M1，赫曲霉毒素A (OA)等。 (2)食品中农药残留的测定 常用ELISA检测的农药残留种类： ①有机磷农药 ②拟除虫菊脂类农药。 (3)食品中致病菌的检测 ELISA法可用于检测食品中沙门菌、金黄色葡萄球菌、军团菌、大肠杆菌等致病微生物。 (4)其他污染物成分及违禁药物检测 盐酸克伦特罗 （瘦肉精 ） 传统检测方法(如化学分析法、比色法和微生物法)不同程度存在对实验人员有较高的要求，样品基质背景复杂，前处理过程烦琐，需要耗费较多的时间，被测感分浓度较低，分析仪器的定性能力受到限制，仪器检测灵敏度不够等不足之处，不但不适于大批量产品质量的监控，也很难达到国际上现行的、越来越严格的标准。 ELISA技术虽然只有短短几十年，但因其简便、快速、灵敏、微量化等诸多优点，国内外有多家公司制作了大量的ELISA商业试剂盒，可供作相应项目的检测。 ELISA技术还应从以下几个方面不断发展，如:通过DNA重组技术和蛋白质工程技术，研究开发高免疫原性的重组抗原替代在天然材料中无法分离纯化的抗原物质，进而扩大ELISA检测范围; 通过重组工程技术表达特定的融合蛋白，将多种不同蛋白质的功能构建在一起，可以快速方便地同时检测多项标志物以用于多项标记快速测定。 另外，还需进一步加强酶体外定向进化用于免疫检测的研究和全自动酶联免疫测定仪在食品安全检测中的应用。 第七节 聚合酶链检测技术 聚合酶链反应(PCR)又称无细胞分子克隆系统或特性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，是1985年由美国加州Mullis博士 等人创立的一种体外酶促扩增特异DNA片段的方法，发明人Mullis也因此获得1993年诺贝尔化学奖。 PCR技术在疾病诊断、食源性病原菌和食品转基因成分的检测等方面得到了广泛的应用并显示出巨大的发展潜力。 PCR的特点 1.特异性强 2.灵敏度高 3.操作简便快速 4.对标本纯度要求低并且无放射性污染 5.可扩增RNA或DNA 美国ABI 实时荧光定量PCR芯片系统 美国ABI 2720型PCR扩增仪 PCR的类型 PCR因实验材料、实验目的和实验要求等的不同，在标准PCR的基础上，已衍生出近几十种不同类型的PCR ，这些PCR和标准PCR的原理相同，但是由于实验目的不同，具体的操作过程略有不同。 美国ABI 7900高通量快速实时PCR系统 思考题 1.食品安全检测技术的主要内容是什么? 2. GC-MS联用仪和气相色谱仪有何区别? 3.酶联免疫吸附测定原理是什么? 4.聚合酶链检测技术(PCR)有何特点? 一、生物芯片分析步骤 二、生物芯片在微生物检测中的应用 采用基因芯片技术建立的水中常见致病菌的检测与鉴定方法: 致病菌污染饮用水可导致多种疾病的暴发与流行，严重威胁着人类的健康。 传统的细菌培养方法及生化鉴定，操作繁琐，且需要数天才能得到结果。 常规PCR一次只能检出一种致病菌，对水中分离的未知菌，或有多种细菌污染的样品则显得无从下手。 利用在细菌学分类上具有重要意义的16SrRNA基因作为检测的靶分子，并在其间设计检测探针，建立一套水中致病菌的基因芯片快速检测技术(4h)。（可以定性和半定量地检出致病菌。用这种芯片可以特异地检出水中副溶血弧菌、李斯特菌、耶尔森菌、变形杆菌及铜绿假单胞菌等）。 基因芯片与传统方法相比其先进性 ①基因芯片可以对水中致病菌实现高通量、并行检测，一次实验即可得出全部结果; ②操作简便、快速，整个检测4h基本可以得到结果，而传统的方法(包括仪器分析)一般需要4-7天; ③特异性强、敏感性高，可以检测水中常见的致病菌。 三、基因芯片检测致病菌的特点 ①基因芯片可以实现对样品的高通量检测： （可以同时对成千上万个样品进行检测与分析） ②芯片技术可以对大量样品进行“并行”检测。 ③在基因芯片分析中可以采用荧光对样品进行标记。 ④反应体积小，降低了试剂的消耗。 ⑤反应物在单位体积内浓度高，反应快，缩短检测时间。 ⑥特异性较强基因芯片检测的特异性与传统的PCR结合探针杂交检测的特异性一致。 ⑦基因芯片可以完全实现自动化及快