细胞活体染色技术.ppt

细胞活体染色技术 生物学基地 王婷婷 一、实验目的 1．学习细胞活体染色的方法。 2．观察动、植物活细胞内线粒体，液泡系的形态、数量与分布。 二、实验原理 活体染色是利用某些无毒或毒性较小的染色剂，在不影响细胞生命活动的情况下显示细胞的天然构造，更具真实性。活性染色又分为体内活体染色和体外活体染色。 詹纳斯绿B(Janus green B)能够活染线粒体为蓝色，主要是由于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染料始终保持在氧化状态(即有色状态)，在周围的细胞质内，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 中性红是液泡系的特殊活体染色剂，它可将不同发育时期的液泡染成不同深度的红色，在细胞处于生活状态下细胞质和核不被染色，该染料对液泡系具有一定专一性。 台盼蓝(trypan blue)是一种偶氮类酸性染料，它可以通过死亡细胞的质膜而使细胞着色，但不能通过活细胞的质膜，故可用台盼蓝鉴别活细胞与死细胞。 三、实验用品 (一)材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 (二)器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、表面皿、载玻片、盖玻片、吸管、收水纸等。 三、实验用品 L．Ringer氏液 NaCl 0．90g KCl 0．42g CaCl2 0．25g 三、实验用品 2．1／3000中性红溶液 先配制l％的中性红Ringer氏原液，因中性红难溶解，需稍加热，(30℃-40℃)使之溶解，过滤，将滤液装入棕色瓶中暗处保存，临用前取少许原液用Ringer氏液稀释成1／3000的中性红溶液。 三、实验用品 3．1／5000詹纳斯绿B 先配制1％詹纳斯绿B溶Ringer氏溶液，方法同上。 4．台盼蓝染色液 将l克台盼蓝溶于100毫升生理盐水中 5．香柏油、二甲苯、蒸馏水等。 四、实验方法 (一)液泡系的中性红活体染色 1．用双面刀片将黄豆芽根尖 (约l-2cm2) 处小心纵切断面，一定要薄且均匀。 2．在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5-10分钟。 3．吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、镜检、注意液泡系染成什么颜色，其形态、大小如何、分布位置。 黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察 四、实验方法 (二)线粒体的活体染色 L．用植物细胞观察线粒体的活体染色 (1)用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块(约lcm2)，放在载玻片上用1/5000詹纳斯绿B染色约30分钟。 (2)吸出染液，滴加Ringer氏液，盖片、镜检，注意观察线粒体分布及所呈形状。 四、实验方法 2．用动物细胞观察线粒体的活体染色 (1)取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。 (2)将肝组织洗净后吸去血液，加入1／5000詹纳斯绿B染液染色30分钟，注意不可将组织块完全淹没。 (3)染色后撕开组织块，这样溶液中就会有一些细胞或细胞群。 (4)用吸管吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液中。垫两根短头发，加盖玻片，即可镜检。 (5)用油镜观察活染色的线粒体标本，要不断地来回转动细调焦螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使材料总是得到氧气，线粒体的染色才显得非常清楚。 四、实验方法 3．人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 （1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1／5000詹纳斯绿B溶液。 （2）用牙签取口腔上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10一15分钟(注意不能干燥)，盖上盖片，吸去多余的溶液，即可镜检。 四、实验方法 （三）台盼蓝染色鉴别死活细胞。 抽取小鼠腹腔水细胞涂于洁净载玻片上，滴加l％台盼蓝1滴，盖上盖玻片于显 微镜下观察。 * * * 口腔上皮细胞示线粒体 * *