从人尿液样品中获得诱导性多能干细胞(iPSCs)---中午翻译.pdf

ＰＲＯＴＯＣＯＬ 从人尿液样品中获得诱导性多能干细胞（iPSCs ） 1,7 1,7 2 1 3 1 Ting Zhou , Christina Benda , Sarah Dunzinger , Yinghua Huang , Jenny Cy Ho , Jiayin Yang , 1 1 1 1 1 3–5 Yu Wang , Ya Zhang , Qiang Zhuang , Yanhua Li , Xichen Bao , Hung-Fat Tse , Johannes 2,6 2,6 1 1,4,5 Grillari , Regina Grillari-Voglauer , Duanqing Pei Miguel A Esteban 1 中国广州中科院再生医学重点实验室，广东省干细胞和再生医学重点实验室，华南干细胞和再生医学研究 2 所，广州生物和医药健康研究所。 奥地利维也纳自然资源和生命科学大学生物技术系衰老和永生化研究小 3 4 组。 中国香港大学李嘉诚医学院玛丽医院医学系心脏病学研究组。 香港大学广东干细胞和再生医学研究 5 6 7 中心。中国广州生物医药和健康研究所。奥地利维也纳Evercyte公司。这些作者对本工作具有同等贡献度。 通讯联系为 M.A.E. (esteban@gibh.org). ２０１２年１１月８日出版发行; doi:10.1038/nprot.2012.115 摘要： 人诱导性多能干细胞（iPSCs）已经以不同的效率从从多种组织中获得。大多数情况下， 供体细胞还是在实验室中以有损伤性的手段获得。这里，我们详细描述了一种从尿液中出现 的脱落的肾上皮细胞获得人 iPSCs 的流程。这种方式有多方面的优势，比如分离尿液来源的 细胞简单（30ml 尿液即足够）；成本较低且具有普遍性（适用于各个年龄、性别和种族）。 并且，整个流程比较高效——尿液分离培养约２周，重编程３－４周；iPSCs 克隆形成能力 一般较高——使用逆转录病毒携带外源基因的方式效率可上升到４％。尿液来源 iPSCs （Ｕ iPSCs）亦显示出良好的分化潜能，因此是从健康个体或者具有遗传性疾病个体包括肾脏疾 病患者获得多能性细胞的较好的选择。 介绍： 自从２００６年，Takahashi和Yamanaka取得的里程碑成就之后 （参考文献１－３）， 将体细胞转换成胚胎（ＥＳＣ）样细胞亦称为重编程就吸引了大量的注意。这项技术在很多 方面都具有显著的应用价值，从体外疾病建模到临床移植上的潜力以及其他４－６，但是一系 列的鉴定事宜却对这个技术提出了质疑（尤其是突变，拷贝数变异，表观遗传突变和免疫原 性）７－１０。为了评估这个问题的普遍性，研究不同供体细胞来源的iPSCs是否具有不同特征 就显得尤为重要了。重编程不同胚层（内胚层，中胚层，外胚层）来源的细胞有益于更好的 理解改变细胞命运的分子机制，这些知识将随之提高相关技术。为了这个结果，包括我们实 验室在内的多个实验室已经系统性的重编程了多种细胞类型，包括皮肤成纤维细胞１, ３，角 １１ １２ １３－１５ １６－１８ １３ １９ 质细胞 ，黑色素细胞 ，脂肪干细胞 ，外周血细胞 ，骨膜 和牙周韧带 ， 神经干细胞２０，肝细胞２１，羊水细胞２２, ２３和来自胚胎外组织的细胞（脐带血和基质，胎盘 羊膜和绒毛膜间充质干细胞（ＭＣｓ））１３, ２４－２６，以及其他。 任何一种重编程的方法都需要大量的细胞，因此出现了一系列的问题。这其中我们提到 最多的一个就是捐献样品的人不愿意经受有损伤性的实验过程。血液是相对比较容易的样品 | VOL.7 NO.12 | 2012 | nature protocol