2014猪瘟的流行及防控.ppt

疫苗免疫有没有效主要靠疫苗有效的抗原含量，那么猪瘟疫苗抗原含量的评价方法是什么呢？ 这种方法是多年以前，技术水平有限时能够提供的最好的方法了，但是生物科技发展到现在，就暴露出了这种方法的不足：主要有以下几点。 答案是有，早在1998年，南京农业大学的杜念兴教授就对传统RID检测方法提出了质疑，他使用微量细胞培养ELISA来对通过5万倍RID的多个样品进行检测，发现使用细胞培养法测出的这些样品实际猪瘟病毒含量相差1000倍。 而我们成都天邦在猪瘟疫苗抗原含量检测上，已经开始使用细胞培养法来测定疫苗抗原含量，这里需要说明一下，目前市场上有些企业在宣传检测病毒粒子数来定量猪瘟疫苗，虽然这种方法比RID检测更加客观，但是这种方法有个很大的缺点就是，不管疫苗中的猪瘟病毒是否具有活性（是死是活）均能被检测出来。问题就在这个地方，由于我们猪瘟疫苗是活疫苗，发挥免疫效力的必须是具有活性的猪瘟病毒（活的病毒），这种方法不能准确反映疫苗中活病毒粒子的含量，对于评价疫苗毒价具有一定的不准确性。而我们选用的细胞培养法间接免疫荧光测定病毒毒价是特异的检测活病毒粒子的方法，更能够准确反映疫苗的效力。左边是我们进行抗原含量测定时的照片（即通过进行荧光染色后，细胞中猪瘟病毒所发出的绿色荧光），右边是今年成都天邦生产的猪瘟疫苗部分批次抗原含量测定结果。我们成都天邦从今年开始就使用双重方法检测猪瘟疫苗抗原含量，所有猪瘟疫苗在兔体RID测定的基础上，均采用细胞培养进行病毒含量测定，这样既保证疫苗符合国家规定，又保证疫苗实际抗原含量准确、客观。为我们的产品批间稳定性提供了很好的保证。 公司在2014年生产的71个批次猪瘟苗进行毒价测定，70%的产品毒价在4.0-4.5之间，说明公司生产的猪瘟苗稳定性较好；低于4.0的做报废处理。目前，公司初步将猪瘟苗的毒价大于4.0/头份作为产品质量内部控制标准，同时公司也能提供更高毒价的猪瘟苗。那么猪瘟苗的毒价是否越高越好，将会在我们后续的研究中体现。 * 除了成都天邦其它公司的疫苗抗原含量准确吗？这是从市场上购买的6家公司的3批猪瘟疫苗检测结果，从以上数据我们可以看出，6家公司的疫苗都不同程度的存在批间差异，同一公司两批疫苗间抗原含量差异最高可以达到1000倍。这就造成了猪瘟疫苗免疫效果的不确定性，时好时坏，难以保证。 我们具体来看看传统的RID测定和细胞培养测定TCID50之间到底有多大的差别。我们选取了4家公司的3批疫苗进行实验，分别对每个批次的疫苗进行RID和TCID50测定。结果显示主要存在两点问题，一是之间说过了相同的RID不同的抗原含量，二是相同的疫苗批次，RID结果不合逻辑。就拿HDSH公司的疫苗来说，3批通过7500倍RID的疫苗实际抗原含量各不相同，差别较大，同样一头份疫苗中实际抗原含量相差100倍；在来看QYH公司的疫苗同样一批疫苗在15000倍RID检测是不合格，但是在30000倍RID检测时却是合格的，这合理吗？那这批疫苗的RID结果是7500倍还是30000倍呢，这两者之间相差4倍。再一次说明了RID检测方法不能反映疫苗客观抗原含量，造成了大家免疫猪瘟过后效果时好时坏。 这种亚临床感染前面也讲过了，会给整个猪群的健康稳定带来巨大的隐患，所以对于疫苗我们一定要保证实际抗原含量的客观、准确。 目前国内绝大多数猪瘟传代细胞苗仍然采用的是转瓶细胞培养工艺进行猪瘟抗原的培养，这种传统生产工艺存在污染风险高、抗原含量相对较低，产品均一性难以保证等缺点。而我们成都天邦目前正在进行工艺升级，将传统的转瓶培养提升为生物反应器悬浮培养工艺。这就是我们成都天邦其中一条悬浮培养生产线。我们为什么要进行工艺升级呢？首先在图上大家可以看到，生物反应器是采用全封闭管道连接，在生产过程中保证全封闭生产，暴露风险小、污染几率低，提高了产品安全性；再来我们培养的抗原全来自于单个反应罐体，产品均一性高、稳定性好。 下面我们来看看悬浮培养和转瓶培养的不同之处，在培养方式上采用的是微载体悬浮培养，细胞生长在微载体表面，培养时通过将微载体悬浮使细胞均匀分布在整个培养液中；转瓶培养时细胞仅能在细胞瓶内表面生长。那么这样培养有什么优势？从上面的数据中不能发现，采用悬浮培养生产的最低抗原含量都高于转瓶培养的最高抗原含量，所以第一个优势是提高了抗原产量，为产品的有效性打下了基础，再来我们仔细看，转瓶培养的抗原最高和最低含量之间相差1000倍，而悬浮培养仅差30倍，所以第二个优势是提高了抗原生产的均一性，使产品稳定性有了保证。 对于疫苗的稳定性，有一个问题可能常常会被大家忽略，就是疫苗从疫苗生产企业运输到客户手中的整个运输过程是会直接影响到疫苗效力的。我们来看看整个运输过程，首先是疫苗从疫苗生产企业的仓库中出库、出厂，这个阶段的疫苗始终处于低温环境，对疫苗