实验二细菌的染色和细菌细胞构造的观察-实验2-1.PDF

实验2-1 细菌的荚膜染色 细菌的染色和细菌细胞构 造的观察 • 目的要求 • 染色原理 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题 目的要求 • 无菌操作 • 微生物涂片 • 荚膜染色（固氮球菌） • 熟炼显微镜使用 细菌的荚膜染色原理 • 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通 常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景 着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈 一透明圈。由于荚膜的含水量在90% 以上，故 染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。 • 负染色法 实验材料 • 涂片染色用的细菌培养物 – 荚膜染色（固氮球菌）24h 的斜面培养物。 • 用滤纸过滤后的苯胺黑、复红染色液。 • 显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸等。 实验程序 （负染色法的方法和步骤） • （1）制片：取洁净的载玻片一块，加蒸 馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并 涂布。 • （2 ）干燥：将涂片放在空气中晾干或用 电吹风冷风吹干。 • （3 ）染色：在涂面上加复红染色液染色3— 5min 。 • （4 ）水洗：用水洗去复红染液。 • （5 ）干燥：将染色片放空气中晾干。 • （6 ）涂黑素：在染色涂面左边加一小滴 苯胺黑，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触 苯胺黑，使苯胺黑沿玻片后缘散开（夹角 30度），然后推向另一侧，使黑素在染色 涂面上成为一薄层，并迅速风干。 • （7 ）镜检：先低倍镜，再高倍镜观察。 • 观察：背景、菌体、荚膜、细菌形态等， 并绘图。 Free-Living Aerobic Nitrogen-Fixing Bacteria • Large, gram-negative, obligately aerobic rods, capable of fixing N2 nonsymbiotically • Azotobacter has the highest respiratory rate of any living organism (purple bacteria) • Azotobacter cells are very large, almost the size of yeasts, produce cysts Cysts Azotobacter cysts have low endogenous respiration and are resistant to desiccation, mechanical disintegration, and UV as well as ionizing radiation however, they are not especially