小鼠卵母细胞的孤雌激活及体外发育.PDF

维普资讯 孚 第 25卷 第 3期 西北农业大学学报 小鼠卵母细胞的孤雌激活及体外发育 墨全塞 奎塑显 张美佳 张 涌 (西北农业大学动构医学系，陕西拓陵 712100) 摘要 分别用不同条件的电脉冲、酒精浓度棚撒不同卵特的小鼠卵母细胞，进行体补培 养并观察卵母细胞的活化和体外发育情况．结果表明．①以墒强55V／ram．脉寅160us的电 脉冲刺激卵特为l7h的卵母细胞，活化卵形成二原核率为90 I以场强55V／ram，脉宽 640 的电脉冲刺激卵龄为 15h的卵母细胞．激活卵的桑椹胚最高发育率为 69 ．@用 7 酒精 刺激卵龄为 15h的卵母细胞 2min，活化率最高为 72 ，激活卵的桑椹艇发育率为22．2 ． 关键词 卵母细盥 电脉冲．酒精．孤雌生殖，小鼠 中围分类号 $814．6,$865．130．3 P‘f·I；； 研究哺乳动物卵母细胞的孤雌激活及体外发育，有助于探索卵母细胞的生理反应，分 析理化因素激活与精子激活的特征，有助于了解哺乳动物早期胚胎的发育机理。经孤雌生 殖产生的单倍体和纯合体细胞在遗传育种上有着重要的意义。此外，卵母细胞激活和孤雌 发育的研究还能为核移植技术的进一步完善提供理论和实验依据 。卵母细胞激活的方法 较多，如乙醇处理、温度和渗透压的改变、机械刺激、钙离子载体A23187处理、透明质酸 酶处理、氯化锶处理、电刺激和蛋白质合成抑制剂处理等n。然而，由于各研究者采用的激 活方法、培养条件以及动物种类不同，所得结果也不尽相同。本试验试图找出电激活、酒精 激活小鼠卵母细胞的最佳条件并观察其体外发育情况，为小鼠卵母细胞的激活研究提供 数据和资料，为其他动物的有关研究提供参考。 1 材料和方法 1．1 卵母细胞的采集 对 20~25g昆白小鼠每只皮下注射 8IU PMSG，间隔垂8h皮下注射 10IUhCG进 行超排。分别于注射hCG后 15，17，19h，用硬稚脱臼法杀死小鼠，无菌取出输卵管，在实 体显徽镜下，收集卵丘一卵 细胞复合体 (COC)，然后将COC移入浓度为 2g／L透明质酸 酶的PBS液中作用 2～3mln，同时用吸管吹打，去掉卵丘细胞，获得裸卵备用。 1．2 卵母细胞的激活和培养 1．2．1 电激活和培养 电刺激前 ，将卵母细胞在电激活液 (0．3otol／L甘嚣醇溶液 内含 0．1mmol／LMgSO 和 0．05mmol／LCaC1)中平衡 2～4mia，然后将卵母细胞注入含电 激活液的电融合槽中，用异物针拨正卵母细胞，使第一极体与卵母细胞的界面和电流方向 垂直。电激活条件为；场强 55V／mm，脉宽分别为160，320，640u．s，一个 电脉冲。上述卵母 细胞培养前用TCM199洗3次，然后在TCM199培养液中进行徽滴培养 (38．5℃，体积分 收靖 日期 1996—11—19 作者简升 寇垒安，男，1972年生，硬士研究生 维普资讯 第 3期 寇全安等：小鼠卵母细胞的孤雌激活及体外发育 83 数 5 的CO。，饱和湿度)。在培养 6和 9h进行检查，其后隔时观察发育情况。 1、2．2 硒精激活和培养 将注射 hCG后 15h的裸卵分别置于体积分数为 0 ，1 ， 3 ，5 ，7 ，9 ，11 酒精浓度的PBS液中，作用不同时间(0．5，1，2，3，4re[n)后取出， 在M199液中平衡2rain后移入含 5~g／mL细胞松驰素B的M199中进行培养 (39．0~C， 体积分数为5 的CO ，饱和湿度)。4h后取出培养皿，将卵母细胞在M199中洗3次，然 后在M199液中继续培养4h后观察活化情况，其