急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡.PDF

·702 · doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2015.05.15 J South Med Univ, 2015, 35(5): 702-706 基础研究 雷公藤甲素通过雷公藤甲素通过抑制逆转录病毒抑制逆转录病毒HERV-KHERV-K NpNp99 基因转录诱导人基因转录诱导人 急性急性TT 淋巴细胞白淋巴细胞白血病血病JurkatJurkat 细胞凋亡细胞凋亡 陈将华，郑维威，姜旭东，陆晓雅，徐荣臻 浙江大学医学院附属第二医院血液科，浙江 杭州 310009 摘要：目的 探讨雷公藤甲素诱导人急性T 淋巴细胞白血病Jurkat 细胞凋亡分子机制。方法 MTT 检测雷公藤甲素对Jurkat 细 胞的增殖抑制作用，然后用OriginPro8计算出IC50 。按照0、2、4、8、16 nmol/L 浓度雷公藤甲素处理Jurkat 细胞48 h ，然后用流式 细胞仪检测细胞凋亡变化。用半定量RT-PCR 法检测加药处理后各组Np9基因mRNA 的表达水平变化并用Kodak 1D 3.6 软件 对条带进行定量分析。采用统计软件分析Np9转录抑制与细胞凋亡的相关性。Western Blotting 检测Np9下游信号分子c-myc ， β-catenin ，ERK ，AKT 和Notch 1蛋白的变化。结果 雷公藤甲素呈剂量依赖性抑制Jurkat 细胞的增殖，其IC50 为12.7 nmol/L。雷公 藤甲素呈剂量依赖诱导Jurkat 细胞凋亡。进一步实验研究结果显示，雷公藤甲素呈剂量依赖方式抑制Jurkat 细胞中Np9基因的 mRNA 的转录水平。经统计分析发现Np9 转录抑制与细胞凋亡之间具有显著的相关性（R2=0.907）。Western Blotting 方法结果 发现雷公藤甲素在抑制Np9 mRNA 转录同时伴有其下游信号分子c-myc ，β-catenin ，ERK ，AKT 和Notch 1蛋白表达水平降低。 结论 下调HERV-K Np9 mRNA 及其下游信号分子c-myc ，β-catenin ，ERK ，AKT 和Notch 1蛋白水平是雷公藤甲素诱导人急性T 淋巴细胞白血病Jurkat 细胞凋亡的重要分子机制之一。 关键词：雷公藤甲素；急性T 淋巴细胞白血病Jurkat 细胞；凋亡；HERV-K Np9基因 Triptolide induces apoptosis of human acute T lymphocytic leukemia Jurkat cells via inhibiting transcription of human endogenous retrovirus HERV-K Np9 gene CHEN Jianghua, ZHENG Weiwei, JIANG Xudong, LU Xiaoya, XU Rongzhen Department of Hematology, Second Affiliated Hospital, School of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou 310009, China Abstract: Objective To investigate the molecular mechanisms by which triptolide induces apoptosis of human acute T lymphocytic leukemia Jurkat cells. Methods MTT assay was employed to detect the proliferation inhibition of Jurkat cells by triptolide, and the IC50 was calculated by OriginPro8. Flow cytometry was used to analyze apoptosis of Jurkat cells. Np9 mRNA levels were detected by RT-PCR and analyzed quantitatively by Kodak 1D 3.6 software. Correlation between the inhibition