星形胶质细胞通过CX47促进少突胶质前体细胞增殖.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（１２）：２１２９ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 星形胶质细胞通过ＣＸ４７促进少突胶质前体细胞增殖 １ １ ２ １ １ １ １ 李　真 　刘兆雨 　徐　丹 　陈　婷 　孟　赞 　唐　勇 　彭　彦 （１重庆医科大学基础医学院　重庆　４０００１６　２重庆医科大学第一附属医院　重庆　４０００１６） 摘要　目的：研究星形胶质细胞（ＡＳＴ）对少突胶质前体细胞（ＯＰＣ）生长分化的影响及作用机制。 方法：用Ｐ３ＳＤ乳鼠，建立星形胶质细胞与少突胶质前体细胞原代培养体系。实验分两部分，第一 部分为常规 ＯＰＣ培养组、ＡＳＴ分泌因子组、ＡＳＴ与 ＯＰＣ直接接触式培养组；第二部分为ＡＳＴ与 ＯＰＣ直接接触式培养组、缝隙连接干扰对照组、缝隙连接干扰组。免疫荧光鉴定ＯＰＣ与ＡＳＴ细 胞纯度，光镜观察细胞生长状态，流式细胞术检测细胞周期，转录组测序分析不同状态下ＯＰＣ中 缝隙连接蛋白ＣＸ４７差异表达，ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测鉴定转录组测序ＣＸ４７差异表达，ＥＤＵ检 测ＣＸ４７干扰后 ＯＰＣ增殖能力，流式细胞术测干扰 ＣＸ４７后细胞周期变化。结果：光镜与流式检 测发现，与ＡＳＴ接触培养的ＯＰＣ增殖能力最强、新生细胞数目最多。转录组测序分析和ＰＣＲ验 证显示，ＡＳＴ接触调控ＯＰＣ增殖的主要差异表达蛋白为ＣＸ４７，干扰 ＣＸ４７后细胞周期阻滞在 Ｇ１ 期，ＯＰＣ增殖能力明显下降。结论；ＡＳＴ可通过缝隙连接蛋白ＣＸ４７调控细胞周期，促进 ＯＰＣ 增殖。 关键词　少突胶质前体细胞　缝隙连接　髓鞘再生　转录组测序 中图分类号　Ｑ４２１ 　　少突胶质细胞（ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ，ＯＬｓ）作为中枢神经 胞缝隙连接蛋白（ｃｏｎｎｅｘｉｏｎ）ＣＸ４３、ＣＸ４７等基因敲除小 系统唯一的髓鞘形成细胞，对维持髓鞘结构完整性和 鼠中，少突胶质细胞数量大量减少并出髓鞘空泡化的 ［４８］ 促进信息传递发挥着极为重要的作用。众多的中枢神 病理状态 ，ＡＳＴ分泌的ＢＤＮＦ、ＩＧＦ等神经性营养因 经系统退行性疾病都与髓鞘病理性脱失、少突胶质细 ［８９］ 子也可促进少突胶质前体细胞增殖 。 ［１］ 胞发育不良相关 。因此，研究髓鞘形成和髓鞘再生 　　但是，在促进少突胶质前体细胞增殖中，缝隙连接 就成为一个热点问题。其中，能直接分化为 ＯＬｓ的是 和神经性营养因子有不同的调控方式，谁是 ＡＳＴ对 少突胶质前体细胞（ＯＰＣｓ）。ＯＰＣｓ是一类具有着高度 ＯＰＣｓ增殖分化的调控主要因素，以及调控的具体机制 增值特性的多潜能干细胞，特定条件下也能分化为神 等等诸多问题目前并不清楚，国内外也少有报道。本 ［２］ 实验目的就是全方位对比缝隙连接和神经性营养因子 经元、星形胶质细胞 ，如何保证 ＯＰＣｓ在特定条件下 大量增殖及向少突胶质细胞方向分化是修复髓鞘的 的调控，探讨ＡＳＴ对少突胶质前体细胞（ＯＰＣ）生长分 关键。 化的影响及作用机制。 　　在中枢神经组织中，ＡＳＴ作为脑内的数目最多、最 １　材料与方法 ［３］ 主要的大胶质细胞 ，涵盖着ＯＰＣｓ最重要的细胞外环 境，近来研究表明，ＡＳＴ可通过分泌或直接接触，对 １．１　材料与试剂 ＯＰＣｓ增殖分化起到重要的调