树突状细胞对T细胞的增殖作用.PDF

医学研究生学报 ２０１７年１月 第３０卷 第 １期　 Ｊ Ｍｅｄ Ｐｏｓｔｇｒａ，Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ，２０１７ ·５ · 论　 　 著 （基础研究） 重组腺病毒介导人类白细胞抗原⁃Ｇ基因转染恒河猴 树突状细胞对Ｔ细胞的增殖作用 陈　 哲，胡明道，田大广，魏晓平，于恒海，陈　 鹏 　 　 ［摘要］　 目的　 人类白细胞抗原⁃Ｇ（ＨＬＡ⁃Ｇ）通过与树突状细胞（ＤＣ）表面的免疫球蛋白样转录体（ＩＬＴ２）和 ＩＬＴ４ （ＣＤ８５ｄ）结合，广泛参与机体的免疫耐受的过程。 探讨经ＨＬＡ⁃Ｇ重组腺病毒载体感染后的恒河猴未成熟树突状细胞刺激Ｔ 细胞的增殖作用。 　 方法　 麻醉恒河猴获取新鲜骨髓血，采用密度梯度离心法，分离获得的单个核细胞行免疫磁珠法获得 ＋ ＋ ＣＤ３４ 细胞。 添加小剂量细胞因子联合诱导分化ＣＤ３４ 细胞，从而获得树突状细胞。 介导ＨＬＡ⁃Ｇ的重组腺病毒经过转染未成 熟树突状细胞后，检测病毒感染效率，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＨＬＡ⁃Ｇ在未成熟树突状细胞中的表达。 以恒河猴Ｔ 细胞作为反应细 胞，将介导ＨＬＡ⁃Ｇ的重组腺病毒转染的不同状态下的ＤＣ为刺激细胞，进行混合淋巴细胞实验。 设置５组：即成熟树突状细 胞组（ｍＤＣ组）；未成熟树突状细胞组（ｉｍＤＣ组）；ｉｍＤＣ（Ｌ）组：在第７天成功获得ｉｍＤＣ后加入脂多糖 １００ｎｇ／ ｍＬ；ｉｍＤＣ（Ｖ） ＋ 组：重组腺病毒介导ＨＬＡ⁃Ｇ感染的ｉｍＤＣ，方法同前；ｉｍＤＣ（Ｌ Ｖ）组：重组腺病毒同样转染ｉｍＤＣ，同时在培养过程中添加 １００ ｎｇ／ ｍＬ 的脂多糖。 根据ＤＣ与Ｔ细胞不同比例（１∶５、１∶１０、１∶２０、１∶４０）计算各组刺激指数（ＳＩ）。 　 结果　 成功培养获得恒河 猴未成熟树突状细胞，ＨＬＡ⁃Ｇ在该细胞中表达。 流式细胞术检测结果发现 ＤＣ 的纯度高达９２．３％，ｉｍＤＣ组则高达７２．３９％， ＋ ＣＤ４ Ｔ细胞阳性率纯度＞８０％。 混合淋巴细胞实验分析ＤＣ刺激Ｔ 细胞增殖结果表明，不同ＤＣ与Ｔ 细胞比例（１∶５、１∶１０、 １ ∶２０、１∶４０）下，ｉｍＤＣ组ＳＩ为１．６３±０．０３、１．５２±０．０４、１．３９±０．０３和１．２１±０．０１；ｍＤＣ组ＳＩ为２．２３±０．０５、２．０１±０．０３、１．６５±０．０２和 １．５４±０．０５；ｉｍＤＣ（Ｌ）组ＳＩ为２．２５±０．０４、１．９６±０．０２、１．６２±０．０３和１．４８±０．０１；ｉｍＤＣ（Ｖ）组ＳＩ为 １．４６±０．０４、１．３３±０．０２、１．２０±０．０４ ＋ 和１．０４±０．０２；ｉｍＤＣ（Ｌ Ｖ）组ＳＩ为１．６７±０．０３、１．５９±０．０４、１．３８±０．０３和１．２４±０．０３。 与ｉｍＤＣ组比较，ｍＤＣ组、ｉｍＤＣ（Ｌ）组ＳＩ 明 ＋ ＋ 显增高（Ｐ＜０．０１）；与ｉｍＤＣ（Ｖ）组比较，ｉｍＤＣ组、ｍＤＣ组、ｉｍＤＣ（Ｌ）组、ｉｍＤＣ（Ｌ Ｖ）组ＳＩ 明显增高（Ｐ＜０．０１）；与ｉｍＤＣ（Ｌ Ｖ）组 比较，ｍＤＣ组、ｉｍＤＣ（Ｌ）组ＳＩ 明显增高（Ｐ＜０．０１）。 　 结论　 重组腺病毒介导ＨＬＡ⁃Ｇ转染的恒河猴未成熟树突状细胞能够有 效抑制恒河猴Ｔ细胞的增殖。 　 　 ［关键词］　 人类白细胞抗原⁃Ｇ基因；Ｔ细胞；免疫耐受；恒河猴 　 　 ［中图分类号］　 Ｒ３９２．１１　 　 　 ［文献标志码］　 Ａ　 　 　 ［文章编号］　 １００８⁃８１９９（２０１７）０１⁃０００５⁃０５ 　 　 ［ＤＯＩ］　 １０．１６５７１／ ｊ．ｃｎｋｉ．１００８⁃８１９９．２０１７．０１．００２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｎｏｖｉｒｕｓ⁃