牛磺酸拮抗锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡.PDF

第2卷 第11期 2007 年 11 月 中国科技论文在线 SCIENCEPAPER ONLINE 827 牛磺酸拮抗锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡 郭松超，陆彩玲，陈维平，邝晓聪 （广西医科大学公共卫生学院，南宁 530021） 摘 要：【目的】研究牛磺酸对锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡的拮抗作用。【方法】体外分离新生乳大鼠 皮层神经细胞，培养至最佳生长状态时进行实验。细胞随机分为 7 组，即对照组、染锰组（设有低、中、高 3 个剂量）、干预组（3 组，培养液同时加有锰及牛磺酸）。低、中、高锰的浓度分别为 0.2mmol/L,0.6mmol/L 和 1.0mmol/L，牛磺酸的浓度为 1.5mmol/L。干预 24h 后终止培养，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标 记(TUNEL)及流式细胞术(FCM)定性、定量检测神经细胞凋亡的变化。【结果】(1) TUNEL 显示锰干预后神经 细胞呈现典型的凋亡形态学变化：核固缩、碎裂，部分甚至核崩解，出现凋亡小体，且凋亡的神经数量有随着 锰浓度升高而增多的趋势；正常细胞则染色质均匀，形态完整；牛磺酸干预对中低浓度锰有一定的拮抗作用， 高浓度锰未见明显改善；(2) FCM 定量研究表明锰诱导神经细胞凋亡与其浓度有剂量-依赖关系，牛磺酸能拮 抗中低浓度锰所致的细胞凋亡，但对于过高浓度锰所致细胞急剧的死亡—坏死则无改善作用。【结论】锰可致 体外培养的皮层神经细胞死亡（坏死或凋亡），牛磺酸对中低锰所致的凋亡有保护作用，但对于过高浓度锰致 使神经细胞急剧坏死无保护作用。 关键词：预防医学与特种医学；凋亡；牛磺酸；锰；神经细胞 中图分类号：R971 文献标识码：A 文章编号：1673－7180(2007)11 －0827 －8 拮抗作用。 0 引言 1 材料与方法 神经细胞凋亡是机体发育过程中神经系统多余 细胞选择性死亡的一种方式，也常发生于颅脑损伤 1.1 主要试剂、仪器 或颅脑疾病等病理状态下，如脑缺血再灌注损伤、 主要试剂、仪器有：MnCl ·4H O （AR 级，购 2 Alzheimer 病、帕金森病、肌萎缩侧所硬化综合症等 自上海化学试剂供应站），DMEM 新生小牛血清 （购 慢性退行性脑疾病中。锰及其化合物既是人体正常 于 Gibco ）， TUNEL 试剂盒，流式细胞仪（FCM ）， 生长发育所必需，也广泛应用于生产生活。早在一 超净工作台，CO2 培养箱，倒置相差显微镜，恒温 个世纪之前人们已经发现开采锰矿的矿工出现特殊 电热箱等。 的精神症状，引起职业性锰中毒。尽管如今技术条 1.2 神经细胞的体外培养与实验分组 件改进，职业性锰中毒少见，但三羰基甲基环戊二 新 24 h 内的 Wistar 乳大鼠消毒后开颅取脑， 烯合锰(MMT)作为汽油防爆剂的广泛应用，使得 剔除血管脑膜、剥离海马，皮质剪碎、吹打，置备 活接触锰变得更广泛、隐匿，且研究发现，锰与帕 单细胞悬液，台盼兰拒染实验观察细胞活力≥95% 金森疾病相关。体内外研究表明锰可诱导多种类型 5 后调整细胞密度为 10 /mL ，接种到预先涂敷有多聚 细胞凋亡，并且与氧化应激有关。本研究以锰干预 赖氨酸的培养瓶 中，37 ℃、体积分数为 5%CO2 的培 原代培养的皮层神经细胞，检测细胞的凋亡情况，