细胞无菌培养.PDF

细胞无菌培养 CO 培养箱高温干热灭菌及其他污染控制方式 2 摘要 细胞培养过程中微生物的污染是最普遍、最常见的问题！为了避免污染的发生，良好有效的灭菌技 术和细胞培养的无菌处理是非常必要的。其中CO 培养箱起着关键的作用，因为它不仅为细胞培养 2 提供最佳生长条件，也为各种有害微生物提供了良好的生长环境。所以高性能的培养箱都具有多种 特点避免污染的发生，然而在培养箱的购买过程中所需要考虑的不仅仅是产品的技术特点，而且需 要对完整的培养系统、抗污染的原理和理念进行比较和评估。事实证明，整个箱体系统的复杂性并 不能带给用户更多的安全感，在选择培养箱过程中必须综合考虑抗污染能力、操作的方便程度和运 行成本的高低。 目录 ►摘要 ►细胞培养过程中污染控制的意义 ►如何抵抗微生物污染: 去污、消毒、灭菌 ►避免培养箱带来的污染风险 ►培养过程的安全性、有效性不同的抗污染理念的成本 ►BINDER 如何最大限度减少污染风险 ►结论 细胞培养过程中污染控制的意义 细胞培养过程中容易受到各种微生物的污染，如细菌、真菌、病毒等，这些微生物为细胞的培养带 来了很大的风险。由于这些污染物可以在细胞培养中隐藏很长时间不被发现，而当肉眼能够辨别这 些污染物时，污染已经达到了非常严重的程度。这些不易察觉的污染能够夺取培养基的营养成分、 其代谢产物会引起pH 值的变化，最终影响细胞的增殖。而最可怕的是支原体的感染，这可能会改 变宿主细胞的形态，甚至引起染色体畸变，在极端情况下一个细菌的支原体污染就可能会把数周或 者数月的研究成果变得毫无价值！ 细胞培养过程中有无数的途径能够引入污染物：细胞系来源、培养基、血清、其他相关试剂、空气 中的孢子、不当的实验室器皿消毒或者由实验室技术人员操作过程中引入污染…由于证明培养过程 中没有发生微生物污染这一过程非常复杂和繁琐，所以在培养过程中必须建立污染控制的措施。 细胞培养在各种应用领域都有着重大的发展，如：组织工程、细胞再生、组织疗法等，因此对CO2 培养箱的需求和清洁/灭菌程度也有所提高。整个培养过程中，为了能够达到最高标准的可靠性， CO 培养箱起到了关键作用。在所有的细胞培养中都存在一些问题，如自体软骨细胞悬浮培养后注 2 入患者可治愈疾病，但是最终细胞培养的产品不能进行消毒/灭菌，所以直接使用时可能会对人体 造成潜在的危害。由于以上原因，一些国际标准和方法，如GMP （Good Manufacturing Practice ） GCCP （Good Cell Culture Practice ）和European Human Tissue Directive ，建议在人体细胞和组织培 养过程中使用一次性的无菌用品和设备，必须保证这些体外培养的产物在整个培养过程中无微生物 污染，这样不仅能够减少污染传播的风险，更重要的是能够避免患者发生感染、危及生命。 如何抵抗微生物污染: 去污、消毒、灭菌 去污——文献中对这一术语解释得并不清楚，去污被描述为：危险物的去除，如生物、化学或者放 射性污染物，但并没有对其有效性进行量化。 消毒——消毒在无菌技术中起着突出的作用，特定的实验中消毒被定义为能够将某特定的测试菌种 减少5 个数量级，即仅十万分之一的微生物能够幸存。 灭菌——表示使活的微生物彻底消除/失去活性。由于我们不能得到100%的无菌环境，各个国家的 药典都规定灭菌后其污染的风险仅为百万分之一，即 1,000,000 个微生物中仅有一个存活。 世界各国普遍存在多种不同的灭菌标准，并且都提到对消毒灭菌方法有效性的验证过程，特别是在 制药和临床领域。药典指定使用高压蒸汽灭菌、高温干热灭菌、环氧乙烷熏蒸和无菌过滤等灭菌方 法作为常规、基本的灭菌方法，而灭菌方法的有效性和适用性取决于测试生物样本的实际应用过程。 避免培养箱带来的污染风险 细胞培养过程中的灭菌技术对于二氧化碳培养箱来说是一项重大的挑战，因为培养箱不仅为细胞培 养提供最佳生长条件，也为各种有害微生物提供了良好的生长环境。 控制污染过程中，以下几点需要着重考虑： • 培养箱内腔对频繁的化学试剂喷雾/擦拭消毒的适应性，过多的化学试剂的使用降低了CO 培养箱 2 中