人肠型脂肪酸结合蛋白ELISA试剂盒说明书.docx

人肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）ELISA试剂盒分析检测说明书 樊克生物专业供应 本试剂盒仅供研究使用。? 检测范围：????48T???????25?ng/L?-800?ng/L 使用目的：? 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）含量。 实验原理? 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）水平。用纯化的人肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肠脂肪酸结合蛋白（iFABP），再与HRP标记的肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）浓度。 试剂盒组成? 120倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液3ml×1瓶2酶标试剂3ml×1瓶8标准品（1600ng/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×4条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液3ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液3ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液3ml×1/瓶12密封袋1个? 标本要求? 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融? 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤? 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 800ng/L5号校准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液400ng/L4号校准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液200ng/L3号校准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液100ng/L2号校准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液50ng/L1号校准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.?加?样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样?品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。? 3.?温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 ?4.?配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用? 5.?洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。? 6.?加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 ?7.?温育：操作同3。? 8.洗涤：操作同5。? 9.?显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.? 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。? 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。?测定应在加终止液后15分钟以内进行。 注意事项：? 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。? 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。? 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。? 4．?请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 ?5．?封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 ?6．底物请避光保存。? 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.? 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。? 9．本试剂不同批号组分不得混用。? 10.?如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期? 1．试剂盒保存：；2-8℃。?2．有效期：6个月 The?performance?of?kit:? 1?sensitivity:?minimum?detection?concentration?is?less?than?1?standard.?Linearity?of?dilution.?Sample?linear?