人血管生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)分析检测ELISA试剂盒使用说明.doc

人血管生成素受体Tie2（ANG-R-Tie2）分析检测ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用? ????? Purpose目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中转化生长因子（ANG-R-Tie2）的含量。实验原理：???? 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血管生成素受体Tie2（ANG-R-Tie2）水平。用纯化的转化生长因子（ANG-R-Tie2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子（ANG-R-Tie2），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子（ANG-R-Tie2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血管生成素受体Tie2（ANG-R-Tie2）浓度。 ? 试剂盒内容及其配制?： 试剂盒成份 96孔配置 48孔配置 96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 塑料膜板盖 1块 半块 标准品：100ng/ml?? 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 标准品稀释缓冲液 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml） 生物素标记的抗OT抗体 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml） 亲和链酶素-HRP 1瓶（12ml） 1瓶（5ml） 洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） ? ?试剂盒组成：? 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 ? 封板膜 2片（48） 2片（96） ? 密封袋 1个 1个 ? 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：45μmol/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 自备材料?： 1.?蒸馏水。 2.?加样器：5ul、10ul?、?50ul?、?100ul?、?200ul?、500ul、1000ul。 3.?振荡器及磁力搅拌器等。 ? 样品收集、处理及保存方法?： 1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、?血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000?×g离心30分钟去除颗粒。 3、?细胞上清液……1000?×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、?组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000?×g离心10分钟，取上清液。 ?5、?保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 ? 人血管生成素受体Tie2ELISA试剂盒操作注意事项： ●?? 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 ●?? 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 ●?? 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 ●?? 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 ●?? 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 ●?? 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 ●?? 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 ●?? 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 ? 安全性?： 1. ??避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2