人神经营养素 4 NT-4 ELISA试剂盒 北京驰明瑞.pdf

人神经营养素4 NT-4 使用说明书 产品编号： 本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！ 试 剂 组 成 名称 规格 数量 保存 包被平底微孔板 96 孔 1 可拆卸板 2-8℃密封冷藏 酶结合物 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏 标准品 1 毫升 6 瓶 2-8℃冷藏 显色剂A 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏 显色剂B 6 毫升 1 瓶 2-8℃避光冷藏 终止液 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏 浓缩洗涤液 （100 倍 10 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏 稀释） 使用说明书 1 份 自备物品 1.酶标仪 （尽量提前预热） 2.微量加液器、吸头 3.蒸馏水或去离子水以及滤纸 操 作 步 骤 1. 取出试剂盒，于室温（20-25 ℃）放置15-30 分钟。实验过程应在室温（20-25 ℃）内进行。 2. 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入100 μl的标准品溶液于空白微孔中。 3. 空白微孔中加入100 μl的样品，空白对照加入100 μl的蒸馏水； 4. 在各孔中加入50 μl的酶标记溶液；（不含空白对照孔） 5. 将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应 1 小时；（在孵育箱中保持稳定的温度与湿度） 6. 充分清洗酶标板3-5 次，保持各孔有充足的水压；（浓缩洗涤液以1：100 的比例与蒸馏水稀释） 7. 酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干； 8. 各孔加入显色剂A、B 液各50 μ；l （不含空白对照孔） 9. 20-25 ℃下避光反应15 分钟； 10. 各孔加入50 μ终l 止液，终止反应； 结 果 判 断 1. 30 分钟内在波长450nm 的酶标仪上读取各孔的OD 值； 2. 百分结合率计算：设S0 管计数为B0，各标准管或样品管计数为B，非特异管计数为NSB，则百分结 合率计算公式如下：B/ B0=(B－NSB)/( B0－NSB)×100% 3. logit 计算:各标准点或样品管的logit 值计算公式如下:logit=ln(B/ B0)/(1－B/ B0) 4. 将标准品的OD 均值与标准品0 点的OD 均相除，为标准点的百分结合率，在log-logit 坐标纸上绘图。 5. Log-logit 双对数标准曲线：坐标纸上横轴从左至右第一个1-9 表示为第一个10 进位，第二个1-9 表示 为第二个10 进位。第三个1-9 表示为第三个10 进位。坐标纸纵轴为百分比（1-99 ），即各标准吸光值 的百分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上，同时剩余的点均匀分布在直线的 两边。样品也同样由吸光值计算百分结合率，再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点，此点对应的 横坐标浓度即为样品的浓度，无须换算。 6. 人工处理：以标准浓度取log 值为横坐标，对应的logit 值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横 1 坐标，对应的B/B0 为纵坐标在logit-log 坐标纸上画出标准曲线 （理想化时是一条直线）。根据待测样 品的B/B0 可以从坐标纸上查出样品的浓度值。如果使用普通坐标纸，查出的数值应取反对数才是最 后的浓度值。 7. 自动处理：使用logit-log 或四参数数据处理模式，由电脑自动计算得出结果。 8. 敏感度：1.0ng/ml ； 9. 图例 2 Human Neurotrophin-4 ELISA Kit