细胞免疫组化法筛选口蹄疫病毒单克隆抗体的研究.pdfVIP

2017年第3期 兽医实验室 细胞免疫组化法筛选口蹄疫病毒单克隆抗体 的研究 张燕红 路荣 刘国英 范秀丽 任旭荣 张妍 / 金宇保灵生物药品有限公司 口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口 JMS、O/OZK-93、O/OR-80、Re-A/WH/09、Asia- 蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus，FMDV)引 1/JSL株病毒液，由金宇保灵生物药品有限公司提供。 起的偶蹄兽的一种急性、热性、高度接触性传染病。该 2.细胞培养。24 ～48 h的单层BHK-21细胞，由 病感染途径多、传播速度快，严重危害畜牧业的发展和 金宇保灵生物药品有限公司提供。 国际经济贸易的流通，被世界动物卫生组织 （OIE）列 3.细胞培养基。MEM （宜兴市塞尔生物科技有限 为A类疾病，该病为必须上报的疾病。我国也将其列为 公司），加入10%胎牛血清 （Hyclone公司）。 一类传染病，并列为国家强制性免疫的动物疫病之一。 4. 1.2%GUM胶。将3.6 g GUM胶粉加至300 ml 根据口蹄疫血清型不同，口蹄疫病毒分为O、A、C、 沸水中，用搅拌器混匀，116℃、20分钟高压灭菌，冷却 SAT Ⅰ、SAT Ⅱ、SAT Ⅲ、Asia Ⅰ七个型血清型，且 后冷藏保存。 各个血清型间没有交叉保护力，每个血清型又有很多亚 5. GUM 胶 培 养 基。1.2% GUM 胶 （aladdin） 型，型内不同毒株间的变异可导致抗原差异，这为口蹄 +2XMEM （体积比为1 ∶1），由金宇保灵生物药品有限 疫的诊断和预防带来了极大的困难。 公司按说明书配制。 1975年 ,科学家建立了淋巴细胞杂交瘤技术 ,他们 6.固定液的配制。甲醇 （北京化工厂），丙酮 （天 把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限 津市富宇精细化工有限公司），（体积比为 1 ∶1），置 制生长的骨髓瘤细胞融合 ,形成细胞杂交瘤。通过克隆 于-20℃保存。 化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系,即杂交瘤细胞 7.其他试剂。1%马血清PBS （0.01 mol/L，pH 系,它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的 值7.6）、一抗 （7G3、2B4、3D7、2B5），均由金宇保灵 抗体,即所谓单克隆抗体,简称单抗。与多抗相比,单抗 生物药品有限公司提供；二抗 （羊抗鼠）购自sigma公司； 纯度高,专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应。 Vector VIP substrate kit for peroxidase试剂盒（货号： 1982年，科学家首次研究成功抗O型FMDV单 SK-4600），购自美国Life Technologies公司。 抗以来 ,世界许多国家已先后研制出多株针对各种血清 型的单克隆抗体。目前FMDV单克隆抗体主要应用于 二、方法 FMDV抗原位点的分析与定位、FMDV受体结合位点的 1.细胞培养。将BHK-21细胞悬液加入到六孔板中， 研究、FMDV抗原结构与生物学功能相关性研究、鉴定 每孔加2ml，培养24h长满单层。 并跟踪病毒株抗原变异等方面，同时，FMDV单抗还可 2.稀释病毒。将O/GX/09-7、O/Mya98/XJ/2010、 以根据流行毒株的中和单抗谱 ,从疫苗毒中选择出相近 O/JMS、O/OZK-93、O/OR-80、Re-A/WH/09、 -4 -5 -6 毒株