羊传染性脓疱病毒CEV112基因的克隆与原核表达.pdfVIP

， ， （）： ２０１７ ３８３ ６８７２ Ｐｒｏ ｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇ ｙ 羊传染性脓疱病毒ＣＥＶ１１２基因的克隆与原核表达 杨小健，李亚颖，庞 峰，李国华，彭冬梅，朱 姝，聂 鑫，曹瑞勇，王凤阳，杜 丽 　 　 　 　 （海南大学热带农林学院，海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海口市动物基因工程重点实验室，海南海口 ） ５７０２２８ 摘 要：为了克隆羊传染性脓疱病毒ＣＥＶ１１２基因并对其进行原核表达，根据 ＧｅｎＢａｎｋ 中ＣＥＶ１１２基 　　 　 因序列信息设计 对引物，以 基因组为模板，采用 扩增出 条大小为 的 基因，将 １ ＣＥＶ ＰＣＲ １ ８６７ｂ ＣＥＶ１１２ ｐ 其连接到 载体上，构建 重组质粒，转化到大肠埃希菌（ ） 感受态细 ＭＤ２０Ｔ ＭＤ２０ＴＣＥＶ１１２ Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ ｐ ｐ α 胞中，提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建重组质粒 ，转化到 （ ）感受 ＥＴ２８ａＣＥＶ１１２ Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１ ＤＥ３ ｐ 态细胞中。经 诱导表达，表达产物用 和 进行分析。结果表明，成功构建了 ＩＰＴＧ ＳＤＳＰＡＧＥ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 原核表达载体，并在 （ ）中表达了 基因，表达的融合蛋白大小约 ＥＴ２８ａＣＥＶ１１２ Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１ ＤＥ３ ＣＥＶ１１２ ｐ ，且主要以包涵体形式存在，为后续开展 基因的功能研究奠定了基础。 ３６ｋｕ ＣＥＶ１１２ 关键词：羊传染性脓疱病毒； 基因；克隆；原核表达 ＣＥＶ１１２ 　　 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６５９．１ Ｑ７８９ Ａ １００７５０３８２０１７０３００６８０５ 羊传染性脓疱（ ， ）俗称 株，由本实验室保存； 和 Ｃｏｎｔａ ｉｏｕｓｅｃｔｈｍａ ＣＥ Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１ 　　 ｇ ｙ α 羊口疮，是由羊传染性脓疱病毒（ ， ）引 （ ）感受态细胞，由本实验室氯化钙法制备。 ＣＥ