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2第二章培养基及配制课件
1 无 机 盐 元素名称 添加形式 N KNO3, NH4NO3 大量 P KH2PO4 NaH2PO4 元素 K KCl KNO3 (≥0.5mmol/L) Ca CaCl2 ·2H2O Mg Mg2SO4 · 7H2O S Mg2SO4 · 7H2O Fe FeNa2-EDTA 微量 B H3BO3 元素 Mn MnSO4 (≤ 0.5mmol/L) Cu CuSO4 Mo Na2MoO4 · 2H2O Cl CaCl2 ·2H2O 2.2 肌 醇 促进愈伤组织生长、胚状体和芽的形成 对组织细胞繁殖、分化的促进作用 浓度100 mg/L 3 碳源和能源 4 植物激素 4.1.生长素类 (1)种类 IBA—吲哚丁酸; IAA—吲哚乙酸; NAA—萘乙酸; 2,4-D---2,4-二氯苯氧乙酸 使用效价: IAAIBANAA2,4-D NAA、IBA →生根培养 2,4-D →愈伤组织诱导与增殖 (2)作用 诱导愈伤组织和根分化,促进细胞分裂和伸长。 NAA和IBA常与细胞分裂素结合用于芽的增殖。 (3)浓度 0.05-5mg/L (4)配制 生长素可溶解在稀NaOH中或溶于乙醇。 4.2 细胞分裂素(CTK) (1)种类:Kt---激动素 BAP---苄氨基嘌呤 2-iP---异戊烯腺嘌呤 ZT-玉米素 TDZ (2)作用:启动脱分化、细胞增殖,诱导愈伤组织芽分化、芽增殖,丛生芽。 (3)浓度:0.05-10.0mg/L (4)配制:溶于稀酸或稀碱 CTK+IAA的结合是实现器官发生很好的配合方式。 eg:快繁技术. 4.3 赤霉素(GAs) (1)种类:GA3 (2)作用:促茎伸长,促胚发育成植株;打破休眠;一般在器官形成后加入。 注意:不耐热;生理活性5-15d,时间太长有抑制作用。 较生长素和细胞分裂素少用,可溶于水。 5 琼脂/培养体支持材料 5.1.琼脂 (1)用量 6-10g/L (2)种类 琼脂粉 琼脂条 (3)作用 固化作用 注意:琼脂使用有优缺点;新买应试凝固力。 不凝原因:①pH5不凝;②长时间高压灭菌; ③长期存放,易变质;④厂家不同,杂质含量不同 ⑤配制时融解不充分,分装不均匀; 6辅助性物质 6.4 其它成分: AgNO3 : 作用:吸附Eth,促进茎芽分化,防玻璃化苗、早衰、落叶;只能短期培养, 用量 1~10mg/L,需过滤灭菌 pH值 在灭菌之前培养基的pH值一般都是调节到5.0-6.0。 一般来说,当pH值高于6.0时培养基将会变硬; 低于5.0时,琼脂不能很好地凝固。 pH值对不同植物的影响会有差异,如玉米胚乳愈伤组织在pH值7.0时鲜重增加最快,在pH值6.1时干重增长最快。 第二节 培养基的制备 1 水和药品 水是植物原生质体的组成成分,也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少的物质。 配制培养基母液时要用蒸馏水或重蒸馏水,以保持母液及培养基成分的精确性,防止贮藏过程发霉变质。 药品应选取等级较高的化学纯或分析纯; 药品的称量一定要准确、正确,防止药勺之间的交叉污染。 2.1 母液(贮备液,stock solution)配制的目的 (4)母液配制的药品与器材 (5)母液配制(以MS培养基为例)
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