实验2柱层析和薄层层析.ppt

薄层色谱与柱层析 指导教师：何卫民 有机化学实验 湖南大学化学化工学院实验中心 主要内容 实验目的 实验原理 实验药品 实验装置 实验步骤 实验注意事项 问题与讨论 实验目的 了解色谱法分离提纯有机化合物的基本原理和应用。 掌握柱层析、薄层层析的操作技术。 实验原理 利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附，或分配作用，从而使各组分分离。 本实验薄层色谱法中用的吸附剂为硅胶G，展开剂是9∶1的无水苯和乙酸乙酯的混合溶剂。最开始苏丹Ⅲ和偶氮苯被吸附在硅胶上，当展开剂通过时，由于苏丹Ⅲ和偶氮苯本身极性和在展开剂中的溶解度不同，两者在硅胶上的移动速度也就不同（一般溶解度大和极性小的移动更快），从而将混合物分开，并且可根据产生的不同比移值Rf来定性的鉴别化合物。 Rf ＝ L1 L0 溶质的最高浓度中心至原点中心距离(L1) 展开剂前沿至原点中心距离(L0) 本柱层析实验用中性氧化铝为吸附剂，95%乙醇为洗脱剂。最初吸附剂将荧光黄和碱性湖蓝BB混合物中各组分先吸附到其表面上，而后用溶剂洗脱。溶剂流经吸附剂时发生无数次吸附和脱附的过程，由于各组分被吸附的程度不同，吸附强的组分移动得慢留在柱的上端，吸附弱的组分移动得快在柱的下端，从而达到分离的目的。 实验药品 薄层色谱： 1%偶氮苯的甲苯溶液，1%苏丹Ⅲ的甲苯溶液，硅胶板，体积比9:1的甲苯一乙酸乙酯。 柱层析： 中性氧化铝（100~200目），1 mL溶有1 mg荧光黄和1 mg碱性湖蓝BB的95%乙醇溶液。 实验装置 薄层色谱 柱层析 实验步骤 ----薄层色谱 点样 1.分别在距一端1 cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。 2.取管口平整的毛细管插入样品溶液中，在一块板的起点上点1%的偶氮苯的甲苯溶液和1%的苏丹Ⅲ甲苯溶液两个样点，样点间相距1～1.5 cm。 3.如果样点的颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样点干燥后进行。样点直径不应超过2 mm。 展开 1.展开用9：1（体积比）的甲苯一乙酸乙酯为展开剂。 2.瓶的内壁贴一张高5 cm，环绕周长约4/5的滤纸，下面浸入展开剂中，以使容器内被展开剂蒸气饱和。 3.待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的250 mL广口瓶中进行展开。点样一端应浸入展开剂0.5 cm。 4.盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升至离板的上端1 cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，晾干后观察分离的情况，比较二者Rf值的大小。 1cm 1~1.5cm L1 L0 实验步骤----柱色谱 装柱 1.取15 cm×1.5 cm色谱柱一根，以25 mL锥形瓶作洗脱液的接收器。 2.用镊子取少许脱脂棉放于色谱柱底部，轻轻塞紧，再在脱脂棉上盖一层厚0.5 cm的石英砂，关闭旋塞，向柱中倒入95%乙醇至约为柱高的3/4处，打开旋塞，控制流速。将95%乙醇与中性氧化铝先调成糊状，再徐徐倒入柱中。用木棒轻轻敲打柱身下部，使填装紧密，当装柱至3/4时，再在上面加一层0.5 cm厚的石英砂。 上样 3.当溶剂液面刚好流至石英砂面时，立即沿柱壁加入1 mL已配好的含有1 mg荧光黄与1 mg碱性湖蓝BB的95%的乙醇溶液，当此溶液流至接近石英砂面时，立即用0.5 mL 95%乙醇溶液洗下管壁的有色物质，如此连续2～3次，直至洗净为止。然后在色谱柱上装置滴液漏斗，用95%乙醇作洗脱剂进行洗脱，控制流出速度如前。 4.蓝色的碱性湖蓝BB因极性小，首先向柱下移动，极性较大的荧光黄则留在柱的上端。当蓝色的色带快洗出时，更换另一接收器，继续洗脱，至滴出液近无色为止，再换一接收器。改用水作洗脱剂至黄绿色的荧光黄开始滴出，用另一接收器收集至绿色全部洗出为止，分别得到两种染料的溶液。