NO4生米卡链霉菌DNA对北里链霉菌原生质体种间转化.pdf

维普资讯 中月抗生寨杂盎~1991116(1)：2O～24 生米卡链霉菌DNA对北里链霉菌原生质体种间转化 孙 胜 衷丽蓉 (四川抗菌素工业研究所，成都610051) 铺‘ 裹 采用 SDS-苯酚法提取生米卡链霉菌DNA，同时以sDs处理生米卡链霉菌原生质 体得到辞离 DNA．将提取DNA及游离 DNA转化北里链霉菌原生质体，得到1O—t的转化率 转 化子经发酵得挂晶白毒素，其产量比亲本高5．2倍，同时发现组盼亦有所变化，A罐贽【占L9．1％挺 高到36．7％． 关■蔼 生米卡链霉菌j北里链霉菌，转化 诱变育种在抗生素的菌种选育中已被人 (42 ·4000) 以PwPx配制 l90 苯 酚 以 们广泛采用。近年，再生及融合等也被认为 0．02mol／LTris--0．01otol／L EDTA (pH 是有效 的手段之一 “．2】。在链霉菌中，转化 7．8)配制}TE由lOmmol／LTris--10mmol 被作为另一种遗传重组方式用于选育。我们 ／t EDTA，pH7．8，灭菌后备用， 溶菌酶 以柱晶 自霉素产生菌一北里链霉菌及麦迪霉 (20mg／m1)、RNA酶 (5rag／mr)以TE配 素产生菌一生米卡链霉菌四川 变 种。 为材 制}14 十二烷基硫酸钠 (SDS)}95％冰 料，进行种间的原生质体DNA转化的研究， 冷乙醇；SSC-S由0．15mol／L NaCUI,：10．01 并对部分转化子抗生素产量及组份 进 行 分 mol／L柠檬钠和0．~mol／L蔗糖而成。 析。 ’ 三、茵丝生长厦愿生质体制备 将斜面孢子接种于含一定甘氨酸的s培 材料与方法 养基中，28℃摇瓶培养68~72小时，取出离 一 、 菌种 心收集菌丝，原生质体制备方法具体参照文 北里链 霉菌 (S．翮ds 0 sis)85-21 献C73。 (VBD 和生米卡链霉菌四川变种 (S．my· 四、愿生质体 再生 ∞ ∞) 8-4—10 (Pro一) 具体参照文献[4]。于RCM 上再 生。 二、培养基盈试村 五、8-4-10菌株DNA的提取厦蛔胞 游 1．培养基 离DNA的获得 ． S培养基tS培养基 中加胰胨4 参照文献 (8]。将离心收集的8-4-10菌 P,x培养基：P3培养基 ‘中加入精氮酸 株的菌丝体 以TE洗涤一次，然后悬浮干1／lO 2g，组氨酸0．3g，酪蛋 白水解物0．1g， 酵 体积 (与菌丝体体积相比)的TE中 若菌丝 母膏4g，蛋白腺4g。 体一TE的总体积为 4ml，则依次加入下列 PwPx培养基I将Psx中的MgC12·6H2O 试搠或溶液。 和CaCl2·2Hp分别增加 1倍及3倍。 1．20rag／mr的溶菌酶1．33mi(最 终 浓 RCM 再生培养基tCM 培养基 ‘中加 度 5ml／m1)，37℃水溶30分钟 酵母膏3g。 2．RNA酶0．1ml，保温3O分钟。 2．试_剂 3．14％SDS0．76m1(最终浓度 2 )， 培菌酶 (10rag／m1) 由P3x配料jPEG