微生物检测生化试验详解.ppt

微生物检测生化试验 分析中心 各种细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来区别和鉴定细菌的种类。利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生物化学试验或称生化反应。 谢谢大家！ * 微生物常见生化试验 生化试验 三糖铁（TSI）琼脂 糖（醇、苷）发酵试验 氨基酸脱羧酶试验 MR-VP试验 吲哚试验 硝酸盐还原试验 生化试验 营养物质 分解糖的类型 硫化氢指示剂 酸碱指示剂 还原剂 三糖铁 TSI 细菌只分解葡萄糖 产酸pH下降 斜面和底层全部变黄 TSI 细菌只分解葡萄糖 产酸pH下降 斜面和底层全部变黄 TSI 细菌只分解葡萄糖 产酸pH下降 斜面和底层全部变黄 葡萄糖量少产酸量少 暴露于空气中分解 细菌分解蛋白胨生成 碱性物质中和酸 pH上升斜面变红 底层缺氧酸不分解保 持黄色 CO2 OH- TSI 细菌只分解葡萄糖 产酸pH下降 斜面和底层全部变黄 葡萄糖量少产酸量少 暴露于空气中分解 细菌分解蛋白胨生成 碱性物质中和酸 pH上升斜面变红 底层缺氧酸不分解保 持黄色 细菌产生H2S与铁盐作用 生成黑色硫化铁 TSI 细菌只分解葡萄糖 产酸pH下降 斜面和底层全部变黄 葡萄糖量少产酸量少 暴露于空气中分解 细菌分解蛋白胨生成 碱性物质中和酸 pH上升斜面变红 底层缺氧酸不分解保 持黄色 细菌产生H2S与铁盐作用 生成黑色硫化铁 TSI 细菌能分解葡萄糖、 乳糖、蔗糖 产酸pH下降 斜面和底层全部变黄 但产酸量大 扩散到表面 斜面、底层均为黄色 产气的菌有气泡 TSI 细菌能分解葡萄糖、 乳糖、蔗糖 产酸pH下降 斜面和底层全部变黄 但产酸量大 扩散到表面 斜面、底层均为黄色 产气的菌有气泡 产气量大的会有断层 TSI 细菌能分解葡萄糖、 乳糖、蔗糖 产酸pH下降 斜面和底层全部变黄 但产酸量大 扩散到表面 斜面、底层均为黄色 产气的菌有气泡 产气量大的会有断层 TSI 细菌能分解葡萄糖、 乳糖、蔗糖 产酸pH下降 斜面和底层全部变黄 但产酸量大 扩散到表面 斜面、底层均为黄色 产气的菌有气泡 产气量大的会有断层 TSI 分解糖的类型 产气 产H2S气体 糖（醇、苷）发酵 不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因 而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即 使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物亦可不同。 一般在基础培养基中加入0.5-1.0％特定糖（醇、苷） 类及酸碱指示剂（溴麝香草酚蓝）。通过观察细菌对培 养基中所含糖（醇、苷）降解的能力来鉴定细菌的种类 。所以糖（醇、苷）发酵是鉴定细菌生化反应试验中最 主要的试验。 ?? 液体 半固体 接种培养 液体 半固体 观察结果 有的细菌可将七叶苷分解成七叶素，七叶素与培 养基中枸橼酸铁的二价铁离子反应，生成黑色的 化合物，使培养基呈黑色。 七叶苷水解试验 氨基酸脱羧酶试验 细菌利用培养基中的葡萄糖为氨基酸脱羧制造酸性环 境。脱羧酶是一种诱导酶，在没有相应氨基酸的培养 基中细菌不产生该酶。细菌产生氨基酸脱羧酶使氨基 酸脱羧生成胺和二氧化碳，由于胺的生成使培养基变 为碱性。在这个过程中溴甲酚紫作为酸碱指示剂颜色 先由紫色变为黄色，又在脱羧后变回紫色，而不含氨 基酸脱羧酶的保持黄色。 阳性：试验管-紫色，对照管-黄色 阴性：试验管-黄色，对照管-黄色 MR-VP试验 MR（甲基红）试验：检测细菌发酵葡萄糖产酸的能力。 葡萄糖 丙酮酸 甲酸、乙酸、乳酸 pH下降低于4.4 甲基红为红色 葡萄糖 丙酮酸 脱羧成醇 pH维持在6.2 甲基红为黄色 阴性 阳性 V-P试验：检测细菌利用葡萄糖产生乙酰甲基甲醇的能力。 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 脱羧 碱性条件（乙液） 氧气 二乙酰 + 蛋白胨中的胍基 红色络合物 加速反应 α-萘酚（甲液） 阴性 阳性 吲哚试验 某些细菌能产生色氨酸酶，分解培养基中色氨酸，产生 吲哚（靛基质），于吲哚试剂中的对二甲基氨基苯甲醛 结合，形成玫瑰红色物质。 阴性 阳性 硝酸盐还原试验 某些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原成 亚硝酸盐、氨或氮气。A液（对氨基苯磺酸冰醋酸溶液） B液（α-萘胺乙醇溶液） 硝酸盐 亚硝酸盐 A液冰醋酸 亚硝酸 A液对氨基苯磺酸 重氮基苯磺酸 B液α-萘胺 N-α萘胺偶苯磺酸（红色） 阳性 阴性 空白 如果欲检查培养基中硝酸盐是否被分解，可取锌粉 少许加入培养基内，如出现红色表明硝酸盐仍存在 ，若不出现红色，表示硝酸盐已被分解。 *