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微生物革兰氏染色法和芽孢染色法详解
革兰氏染色法 实验目的 学习并掌握革兰氏染色方法;了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 实验原理 革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法,由丹麦病理学家Hans Christian Gram 于1884年创立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。 革兰氏染色原理 实验器材 1)菌种: 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌 2)染色剂:结晶紫,番红 3)器材:显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶、擦镜纸等 实验步骤 实验结果 细菌芽孢染色法 实验目的 学习并掌握芽孢染色方法;初步了解芽孢杆菌的形态特征。 实验原理 芽孢:某些细菌在一定的环境条件下,能在菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体,是细菌的休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。 细菌芽孢染色法 实验器材 1)菌种:枯草芽孢杆菌 2)染色剂:5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液 3)器材:显微镜、滴管、酒精灯、载玻片、接种环等 细菌芽孢染色法 实验步骤 * * 实验二 革兰氏染色法和芽孢染色法 第一步:初染:结晶紫使菌体着上蓝紫色;第二步:媒染:碘和结晶紫形成大分子复合物,能被细胞壁阻留在细胞内;第三步:酒精脱色:细胞壁成分和构造不同,出现不同的反应——G+菌:细胞不能被酒精脱色,仍呈紫蓝色;G-菌:酒精将细胞脱色,细胞无色;第四步:番红复染, G-菌呈红色, G+菌呈紫蓝色。 革兰氏染色法 混合涂片法涂片、干燥、固定 结晶紫初染1min,水洗 碘液媒染1min,水洗 用滤纸吸去残水后,将玻片倾斜,在白色背景下,用95%乙醇脱色,直至流出的乙醇无色时,立即水洗 番红复染2min,水洗 干燥后,镜检 注:乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节,脱色不足,阴性菌被染成阳性菌;脱色过度,阳性菌被染成阴性菌 革兰氏染色法 阳性菌(蓝紫色) 阴性菌(红色) 芽孢染色法原理 用弱碱性染料孔雀绿在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体,也可进入芽孢内。进入菌体的染料经水洗后被脱色,而芽孢一经着色后难以被水洗脱,当用对比度大的复染剂染色后,芽孢仍保留初染剂的颜色,而菌体被染成复染剂的颜色,使芽孢和菌体易于区分。 1)改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 制备菌悬液 孔雀绿染液(2滴)水浴加热染色15-20 min 取1小滴,涂片,固定 水洗 番红染液复染2-3min,倾去染液,水洗 镜检 2)Schaeffer-Fulton氏染色法 涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色5min 水洗 番红染液复染2min 水洗 镜检 实验结果 芽孢(绿色) 营养细胞(红色)
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