大鲵虹彩病毒贵州分离株MCP基因的克隆与原核表达.pdfVIP

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2017-06-06 发布于湖北
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大鲵虹彩病毒贵州分离株MCP基因的克隆与原核表达.pdf

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大鲵虹彩病毒贵州分离株MCP基因的克隆与原核表达.pdf

淡水渔业,2017,47 (2): 18-22 2017年3月 Freshwater Fisheries　　　　　　 Mar．2017 大鲵虹彩病毒贵州分离株MCP基因的克隆与原核表达 2 2 2 1 余　波, 王　芳 , 康　超 , 李永霞 , 周思旋 (1．贵州省畜牧兽医研究所, 贵阳　 550005;2．贵州省生物研究所, 贵阳　 550009) 摘要: 根据 GenBank 中大鲵虹彩病毒主衣壳蛋白 MCP(major capsid protein, MCP)基因序列 (序列号: KF512820), 设计一对特异性引物, 以大鲵虹彩病毒贵州分离株基因组 DNA 为模板, PCR扩增大鲵虹彩病毒 MCP基因并测序, 与GenBank 中大鲵虹彩病毒MCP基因进行比对, 然后将其亚克隆到原核表达载体pET -32a (+)中, 转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞, 经IPTG诱导后进行Western blot分析。结果显示: PCR扩增出长度为1392 bp 的片段, 与GenBank 中大鲵虹彩病毒 MCP基因核苷酸序列相似性为99．7% ~99．9%, SDS - 3 PAGE 电泳显示该重组蛋白的相对分子质量约为67×10 。免疫原性检测结果表明, 该重组蛋白可与兔抗大鲵虹彩病毒阳性血清特异性反应, 具有免疫原性。关键词: 大鲵虹彩病毒; MCP基因; 原核表达; 免疫原性中图分类号: S917．4　　　　　文献标识码: A　　　　　文章编号: 1000-6907-(2017)02-0018-05 Cloning and prokaryotic expression of MCP gene of Giant salamander iridovirus from Guizhou strain 1 2 2 2 1 YU Bo , WANG Fang , KANG Chao , LI Yong-xia , ZHOU Si-xuan (1．GuizhouInstitute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Guiyang　 550005, China; 2．GuizhouInstitute of Biology, Guiyang　 550009, China) Abstract: According to the MCP (major capsid protein, MCP) gene sequence of Giant salamander iridovirus (GenBank Accession No．KF512820)in GenBank, apair of specificprimerwasdesignedfor amplifyingthe specificfragmentsof MCP gene．TheMCPgenewasamplifiedfromtheGuizhouisolateofgiantsalamanderiridovirus byPCR, andthenwassubcloned into the prokaryotic exp