急性毒性试验讲义模板详解.ppt

研究内容 动物选择 1、种属 大鼠和小鼠毒性反应基本相似， 但犬科与啮齿科动物存在很大 差别。小鼠致死剂量明显大于犬类动物， 犬和啮齿类之间的差异在5 倍以上。 为了获得更全面的安全性信息，试验应至 少采用两种品系的动 物：一种啮齿类和一种非啮齿类（常用狗或猴 ）。 急性毒性试验一般不使用家兔。 研究内容 给药途径 通常，给药途径应至少包括临床拟用途径和一种能使原形药物较完全进入循环的途径（如静脉注射）。如果临床拟用途径为静脉给药，则仅此一种途径即可。 经口给药，动物一般应先进行一段时间的禁食（通常一夜，不禁水）。因为胃内容物会影响受试物的给药容量，而啮齿类动物禁食时间的长短会影响 到药物代谢酶的活性和受试物 肠道内吸收，从而影响毒性 的暴露。 研究内容 给药剂量水平 急性毒性试验的重点在于观察动物出现的毒性反应。给药剂量应从未见毒性剂量到出现严重毒性 (危及生命的) 剂量，同时设空白和/或溶媒（辅料）对照组。 观察时间及指标 给药后，一般连续观察至少14天，观察的间隔和频率应适当，以便能观察到毒性反应出现的时间及其恢复时间、动物死亡时间等。 研究内容 观察的指标： 包括一般指标（如动物外观、行为、对刺激的反应、分泌物、排泄物等）、动物死亡情况（死亡时间、濒死前反应等）、动物体重变化（给药前、试验结束处死动物前各称重一次，观察期间可多次称重）等。记录所有的死亡情况、出现的症状，以及症状起始的时间、严重程度、持续时间等。 四、 数据分析及评价 1 根据所观察到的各种反应出现的时间、严重程度、持续时间等，分析各种反应在不同剂量时的发生率、严重程度。根据观察结果归纳分析，判断每种反应的剂量－反应及时间－反应关系。 数据分析及评价 2、判断出现的各种反应可能涉及的组织、器官或系统等。 3、根据大体解剖中肉眼可见的病变和组织病理学检查的结果，初步判断可能的毒性靶器官。组织病理学检查应附有病理学检查负责人签名和药品注册申请人盖章的报告及有病变组织的病理照片 五、急性毒性试验常用试验方法 1、近似致死剂量法  该方法主要用于非啮齿类的动物试验。 2、最大给药量法 对于某些低毒的受试物可采用该方法。在合理的最大给药浓度及给药容量的前提下，以允许的最大剂量单次给药或24小时内多次给药(剂量一般不超过5g/kg体重)，观察动物出现的反应。一般使用10-20只动物，连续观察14天。  急性毒性试验常用试验方法 3、固定剂量法（Fixed-dose procedure） 以明显的毒性体征作为终点进行评价。 试验选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量进行试验，特殊情况下可增加5000 mg/kg剂量。实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试物后再禁食3-4小时。采用一次给药的方式进行。 急性毒性试验常用试验方法 若无有关资料可作参考时，可用500mg/kg作为初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000 mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。如初始剂量出现严重的毒性反应，即降低一个档次的剂量进行预试，如此时动物存活，就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验。每个剂量给一只动物，预试一般不超过5只动物。每个剂量试验之间至少应间隔24小时。给受试物后的观察期至少7天，如动物的毒性反应到第7天仍然存在，尚应继续观察7天。 在上述预试的基础上进行正式试验。每个剂量至少用10只动物，雌雄各半。根据预试的结果，在上述四种剂量中选择一个可能产生明显毒性但又不引起死亡的剂量进行试验，如预试结果表明，5.0mg/kg引起死亡，则降低一个剂量档次进行试验 急性毒性试验常用试验方法 4、上下法（阶梯法，序贯法，Up and down method） 该方法由Dixon和Mood首次提出，1985年Bruce又进行了改进，目前是OECD（Organization for Economic Co-operation and Development）和EPA（Environmental Protection Agency）推荐的方法之一。其最大的特点是节省实验动物，同时，不但可以进行毒性表现的观察，还可以估算LD50及其可信限，适合于能引起动