DNA粗提取课件.ppt

429572439gao 专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定 (1)DNA在0.14 mol／L的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 （2）DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精 2、对酶、高温和洗涤剂的耐受性 大多数蛋白质不能忍受60-80度的高温，DNA在80度以上才会变性 洗涤剂对DNA没有影响，能瓦解细胞膜 1、DNA的溶解性 一、DNA的性质： 3、DNA分子的鉴定 沸水浴条件下，加入二苯胺试剂，用玻棒搅拌使DNA溶解，溶液出现浅蓝色。 100度 DNA+二苯胺 蓝色物 实验设计 （一）、实验材料的选取： 用什么材料提取DNA？为什么？ 提示：1、材料要容易得到 2、材料中DNA含量必须丰富 3、DNA的提取相对容易 （一）、实验材料的选取： 鸡血细胞做实验材料。原因： 1、鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得 2、鸡血细胞极易吸水胀破 3、植物细胞外有细胞壁，其他动物细胞制取DNA有时需匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、若是动物细胞，如何获取DNA滤液？ 2、若是植物细胞，如何获取DNA滤液？ 旁栏思考： 1、为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 蒸馏水是低渗溶液，会使鸡血细胞吸水涨破；玻棒的机械搅拌会加速细胞的破裂，从而释放DNA。 2、加入洗涤剂和食盐的作用分别是？ 3、如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解 会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 （三）去除滤液中的杂质 1、滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？ 2、为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？（注意：两种食盐溶液的浓度和作用） 可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质 用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中的杂质。因此，反复溶解与析出DNA，就能除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 （三）去除滤液中的杂质 3、方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白质，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离 （四）DNA的析出与鉴定 1、析出： 滤液+同体积95%冷却酒精 白色丝状物 2、鉴定： 对比反应是为了证明什么？原理？ 100℃ DNA＋二苯胺 蓝色物 2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol／L和0.14 mol／L对DNA有何影响? 1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA 答：B 答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出 3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色 4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液 中的上清液? 答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。 答：D 429572439gao