dna提取课件.ppt

加样器的使用 分子生物学实验 生物科学（动物方向） 高鹏飞 TelEmail：gpf800411@sxau.edu.cn 一、实验课程目的和任务 1．目的 分子生物学是一门实践性强，对实验仪器要求较高的课程，因此开设本课程的目的是使学生掌握分子生物学实验设备的操作方法，具备从事分子生物学相关研究的基本方法，学会发现问题和解决问题的基本技能，为毕业后从事生物学相关的科研和教学工作奠定基础。 2．任务 （1）掌握进行分子生物学研究所需要的最基本的实验操作技术，包括基因组DNA、总RNA的提取，电泳检测等方法。 （2）掌握进行基因工程操作所需要的基本技术，包括感受态细胞的制备、DNA的酶切、重组分子的构建、转化等。 序 号 实验项目名称 实验内容与要求 学 时 实验 属性 开出 要求 1 动物总RNA的提取与电泳检测 动物肝脏总RNA的提取和甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析。掌握实验原理，独立完成实验 5 综合性 选做 2 动物基因组DNA的提取及电泳检测 用酚/氯仿抽提法提取哺乳动物基因组DNA，包括样品的前处理、样品的消化、酚/氯仿抽提、DNA的乙醇沉淀和溶解、DNA的琼脂糖凝胶电泳检测等。 要求学生掌握试剂的配制方法、基因组DNA提取的原理和方法，并独立完成DNA提取的全过程 5 综合性 选做 3 功能基因序列、结构和功能的网络查询 在网络上查询功能基因的DNA序列、cDNA序列和mRNA序列，并分析基因的结构和功能等。 学生应掌握如何在Internet上，尤其在NCBI的GeneBank数据库中查询基因的基本数据资料。 3 设计性 选做 4 PCR基因扩增 设计特异性引物，以猪或鸡基因组为模板进行PCR扩增 让学生应掌握PCR扩增的原理和实验技术 3 设计性 必做 5 DNA重组实验 用T4 DNA连接酶将外源片段与T载体进行连接，构建重组质粒 通过本实验让学生学会DNA重组的连接以及鉴定重组子的方法 3 设计性 必做 6 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 用氯化钙法制备感受态细胞，并完成质粒DNA的转化。 掌握实验原理，独立完成实验 4 验证性 必做 7 质粒DNA的提取 菌株的保存和复苏、平板法分离单菌落、过夜培养、碱裂解法制备质粒等。 要求学生掌握实验原理，独立配制试剂，独立完成实验 4 综合性 必做 8 质粒DNA的酶切及电泳检测 用EcoRⅠ和BamHⅠ对质粒DNA进行酶切分析，对阳性重组子进行鉴定。 要求学生了解实验原理，独立完成实验并分析实验结果 4 验证性 必做 二、实验课程的内容、要求及学时分配 三、考核 以学生的实验操作技能和实验报告撰写两部分综合成绩为考核依据。 鸽肝脏DNA的提取 实验一 提取DNA的主要来源： 1、动物组织及器官 脾、肝、胸腺、鱼类精子等。 2、植物 种子的胚芽等 3、微生物 细菌、酵母菌等 核酸的存在形式： 核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在； 真核生物的染色体DNA为双链线性分子； 原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子； 有些噬菌体DNA有时为单链环状分子； 病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线状及单链线状等。 核酸的分布： 95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内，其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。 RNA分子则主要存在于细胞质中，约占75%，另有10%在细胞核内，15%在细胞器中。 1、核酸的理化性质 DNA为白色类似石棉样的纤维状物。 核酸和核苷酸 大都呈酸味（除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外）。 DNA、RNA和核苷酸都微溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。 DNA钠盐在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。 RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。 在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。 DNA溶液的粘度很大，而RNA溶液的粘度小得多。核酸发生变性或降解后其粘度降低。 核酸受到强大离心力的作用时，可从溶液中沉降下来，其沉降速度与核酸的大小和密度有关。 核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在，用DNP和RNP 表示； DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。 DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。 RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此，在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。 核酸提取的原理 从不同