HIV实验室检测及规范操作.ppt

确认试验的试剂 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。 确认试验方法 包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）。国内常用的确认试验方法是WB。 HIV抗体确认试验 确认检测流程 有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性；如果不满足阳性标准，则判为HIV抗体检测结果不确定。如果出现HIV-2型的特异性指示条带，需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验，呈阴性反应，报告HIV-2抗体阴性；呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析。 HIV抗体确认检测流程 免疫印迹法（WB，HIV-1/2混合型） HIV-1阳性反应 不确定反应 出现HIV-2指示条带 报告HIV-1阳性 不确定反应 阳性反应 阴性反应 报告阴性 每3个月随访1次，共2次，仍属可疑，则报告阴性；如随访期间HIV抗体出现阳性反应则报告阳性。随访期间可根据需要，检测病毒核酸和或P24抗原，作为辅助诊断。 阴性反应 报告阴性 筛查试验阳性反应样品 报告HIV-2血清学阳性 免疫印迹法（WB\HIV-2） 艾滋病实验室诊断确认试验(蛋白印迹Western-Blot)试验 原理 病毒裂解物抗原经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离,然后将分离后的抗原转移(印迹)到硝酸纤维薄膜上,采用类似ELISA的技术, 当样品中含有HIV抗体时,它和印迹在硝酸纤维薄膜上的病毒抗原相结合呈现肉眼可见的特异性带型. HIV-1型主要基因有: 核蛋白带 gag(p17/18,p24,p55), 酶蛋白带 pol(p31,p51,p66), 外膜蛋白带 env(gp41,gp120,gp160) 确认试验结果的判定下面是我国使用WB确认HIV感染的判定标准和判定结果的基本原则。在实际工作中还应参照所用试剂盒说明书综合判定，遇疑难情况应报上级实验室解决。  HIV-1抗体阳性（+） 至少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现，或至少1条env带和p24带同时出现。 HIV-2抗体血清学阳性（+） 同时符合以下2条标准可判为HIV-2抗体血清学阳性：（1）符合WHO阳性判定标准，即出现至少2条env带（gp36和gp140/ gp105）。（2）符合试剂盒提供的阳性判定标准。 HIV抗体阴性（-） 无HIV抗体特异带出现。  HIV抗体不确定（±） 出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。? ? HIV-1抗体特异带包括：env带 gp160/gp120、gp41；gag带 p55、p24、p17（或p18）； pol带 p66（或p65）、p51、p31。? HIV-2抗体特异条带包括：env带 gp140/gp105、gp36；gag带 p56、p26、p16；pol带 p68、p53、p34。（由于使用的毒株不同，HIV-2 env带也可为gp125/gp80、gp36）。 HIV抗体确认试验结果报告 确认试验由确认实验室根据检测结果出具“HIV抗体确认检测报告单”（附表3），报告HIV抗体阳性（+）、HIV抗体阴性（-）及HIV抗体不确定（±）。 ? 符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（+）”，并按规定做好检测后咨询、必威体育官网网址和疫情报告工作。 ? 符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（-）”。如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除因“窗口期”而出现的假阴性结果，建议高危行为后3个月时再做抗体检测。也可进行HIV-1 P24抗原或HIV核酸检测，作为辅助诊断。 ? 符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”，在备注中应注明“3个月后复检”，同时进行以下处理： (1) 随访复检：每3个月随访复检1次，连续2次，共6个月。如果检测时暴露时间已超过3个月，则在3个月后随访1次即可。将前后2份样品同时检测，仍呈不确定或阴性则报告HIV抗体阴性，如果在随访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则报告HIV-1或HIV-2抗体阳性。 (2) 必要时可做HIV-