HPLC分析方法的建立与开发.ppt

（四）定量分析的误差来源和校正方法 色谱定量分析中的每一步操作过程都会带入误差，最后定量分析结果的误差则是前面每一步误差的总合。 1、系统误差 （1）样品制备过程中待测组分的损失 溶解是否完全、浓缩和预分离时是否有挥发、萃取和沉淀是否完全等 （2）色谱仪进样分流比、衰减比不正确或线性响应范围窄 ★进样分流比不正确造成进样量误差； ★衰减比（记录仪）不正确造成峰面积测量误差； ★线性范围过窄，引起进样量不当， ★响应值超过线性范围，出现计算误差 （3）由不正确的标准校正曲线和校正因子引起 曲线A：因在零浓度时仍有色谱峰，可能有杂质未分开 曲线B：在此浓度内，检测器的响应值是非线性的 曲线C：可接受的理想状态 曲线D：表明有样品的损失，可能是色谱柱的非特征吸附，也 可能是样品制备时的损失 （4）测量者不良习惯和偏向引起 　　 由(1)、(2)、(4)产生的系统误差在色谱定量分析中可采用内标法或标准加入法加以校正，由（3）产生的系统误差只能使用已知准确含量的标准样品进行校正。  2、随机误差 色谱定量分析中的随机误差是指那些原因无法查明、大小随机涨落而且不可避免的误差 3.过失误差 　　主要是由操作者工作中的马虎和操作的错误引起的。如：称量错误；样品处理时带入的组分损失和污染；读数错误；仪器操作误差；计算错误等。 * 利用文献的数据进行对比和定性分析 注意HPLC的柱填充技术的复杂性，定性受到限制 最简单的方法：标准添加法 前提：要有标准物 判断的标准：加入标准样后，使未知样色谱峰增高，改变色谱条件，未知峰仍能增高 PDA，光谱图比较、谱库检索 确认色谱峰的纯度 - 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份 -检查是否有共流出的物质（杂质）干扰 色谱峰纯度确认的方法 -用光电二极管矩阵检测器比较光谱图 -峰纯度鉴定，四波长比例 MS，质谱图解析、谱库检索 定量分析 定量分析的具体内容 确定样品的类型，主要成分/痕量成分 使分析条件的分离度（R）大于：1.5 色谱峰的定性，峰一致性测定 检测限及定量限：确定灵敏度及线性范围 用标样建立标准曲线 检查方法的准确度及精确度 用标样定期检查方法 （一）定量分析基础 1.定量分析的基本公式 定量分析的目的： 要确定样品中某一组分的准确含量，是一种相对的定量方法 定量分析的方法： 在某些限定条件下，检测器响应值（色谱峰的峰面积或峰高）---所测组分的数量或浓度成正比， 即： 式中： ---组分i的质量 —组分i的浓度 —组分的校正因子（与检测器的性质和被测组分的性质有关） —组分i的峰面积， —组分i的峰高 2.定量校正因子的测定 （1）绝对校正因子（fi) ★ fi的物理意义:单位峰面积所代表的I组分的量是一个与i组分的物理化学性质和检测器的性质有关的常数 ★定量校正 因子的计算公式为： 式中：Ai 、 hi —i组分的峰面积、峰高 mi 、Ci –- i组分的质量、浓度 （2）相对校正因子（校正因子）： 式中：f -- 相对校正因子 ，简称为校正因子，无因次量 fi , fs—i 物质、基准物质（s）的质量（或浓度) Ai(hi),As(hs)---物质、基准物质的峰面积（或峰高） 质量校正因子(fm) 定义：当物质量用质量来表示时的校正因子称为质量校正因子 (fm),表示单位峰面积所代表的组分质量，质量一般用 g 或 mg 表示. 式中：mi , ms-被测物质、基准物质的质量 Ai , As-被测物质、基准物质的峰面积 （3）校正因子的实验测量方法 ★样品的准备：测定校正因子时，要精密称定适量 被测组分对照品和基准物质，配制成已知准确浓度的样品。 ★样品的测定：在已确定的色谱条件下，量取样品进样，从谱图上获得准确的峰面积 ★计算：根据相对校正因子的计算公式可以算出质量校正因子 （二）定量方法