microRNA检测方法的优缺点评价.pdf

国际检验医学杂志2017年 1月第38卷第1期 IntJLabMed，January2017，Vo1．38，No．1 · 85 · · 综 述 · microRNA检测方法的优缺点评价 祁 双 综述 ，韩崇旭 △审校 (1．扬州大学医学院，江苏扬州 225001；2．苏北人民医院，江苏扬州 225001) 关键词 ：microRNA； 优缺点评价 ； 传 统方法 ； 新方法 DOI：10．3969／j．issn．1673—4130．2017．01．032 文献标识码 ：A 文章编号：1673—4130(2017)01—0085—04 microRNA是 由Lee等 ]在 1993年首次报道存在的，他 低 ，耗时耗力 以及 因为检测限为纳摩尔级别所造成 的灵敏度低 们对线虫体进行了全基因组扫描研究，以此来寻找对秀丽隐杆 下等缺点。针对这些缺点，学者们在此方法上进行一些技术的 线虫的幼虫起重要作用 的基 因。最后发现线虫的发育出现障 改 良。 碍是由于一种被命名为 1in_4的基因发生了变异。但是这项发 1．1．1 使用锁核酸 (LAN)修饰的寡核酸探针 LAN是一种 现在当时并没有被人们引起足够的重视。直到2000年，Rein— 寡核苷酸衍生物即双环的RNA类似物，在结构上与RNA具 hart等 ]在线虫研究中报道了第二种被发现的microRNA分 有相同的磷酸盐骨架，对 RNA具有强大的识别能力和亲和 子 let-7microRNA，这才 引起 了人们 的密切关注 。此后 ，上万 力，可以渗人到DNA的任何位置。LAN也可以增加探针的溶 种不同的microRNA分子在植物、动物和病毒中被发现，其 中 解温度，加强试验物质的稳定性，使检测灵敏度提高 1O倍左 在人类细胞中也发现了2000多种 ，所 占人类基 因组的比重是 右 ”。 1 ，调控着体 内3O％的基因表达 。 1．1．2 使用可溶性的碳二亚胺 (EDC) EDC是一种常用 的 近几年，microRNA 已成为许多生物化学研究者密切关注 失水剂，用来活化核酸的交联。在 RNA 印记法中使用 EDC 的研究热点之一。microRNA是一类长度约 22nt的内源性非 可以提高microRNA与膜的结合效率，实现microRNA和尼龙 编码高度保守的小分子 RNA，通过碱基互补配对 ，广泛地负调 膜 (杂交载体中的膜)的高效联合 ，提高灵敏度 ]。 控靶基 因的表达 。 目前认为，microRNA多以识别靶 microR— 最近，学者又对microRNA检测的标准方法做了一些新的 NA序列的31_UTP并与之互补配对的方式，抑制其翻译过程， 改进，他们为了提高检测的敏感性 ，使用了化学交联 microR— 从而调控基 因表达 ，也有一些学者发现 microRNA可 以识别 NA的印迹膜和混合放大器 ／DNA探针。一种核糖核酸酶保 microRNA 的5UTP，并激活 microRNA 的翻译。microRNA 护法 (RPA)也被学者用 来检测 microRNA，该 法 比传统 的 是抑制或是切割microRNA取决于microRNA与靶序列互补 RNA印迹法所需的样本含量明显减少 ，并且更加方便简单，灵 配对的程度，互补配对高的可能进行切割，反之，配对低的只是 敏度也得到了提高 ]。 抑制，从而降低靶基因的蛋 白水平。 1．2 微阵列法 微阵列法可以同时定量检测多个样本，筛选 microRNA 的表达与许多疾病的发展密切相关，已经被视 出单个样品体积 内数百靶序列，适用于microRNA 的高通量分 为临床上重要的生物标志物。由于 microRNA序列短，片段 析。在一般情况下，微阵列法没有特别适合用于microRNA 的 小，一般只含有二十几个碱基，同族之间序列同源性高，差别 定量检测和决定它的拷贝数，因为它的定量通常是在受限制的 小，而且在细胞 中的表达水平较低再加上缺少多聚腺苷酸的尾 线性范围内，由