PEG修饰蛋白的纯化.PDFVIP

GE 生命科学部层析技术应用部 PEG修饰蛋白的纯化 简介 用PEG 蛋白药物可以解决许多蛋白药物面临的半衰期过 短的问题。PEG 化改善了蛋白的药理学性质，大多数情 况下使得它们在临床上更有效。这一技术在过去20 年中 发展很快，使得PEG 化成为修饰蛋白质和多肽药物的一 个方法。经过采用化学方法聚乙二醇修饰蛋白及多肽药 物后，使得原来的纯品蛋白变成了含有o ligo- ，mo no- ， no n- PEG 蛋白的混合物，我们还需要将均一的PEG- 蛋白 纯化出来。 MacroCap SP 和MacroCap Q 设计分离PEG 化蛋白和其他 大分子。它们的基架是由丙烯基葡聚糖交联氮氮亚甲基 丙烯酰胺构成，具有较大的孔径，平均粒径为50 微米。 它们可以在高的载量的条件下分离mono-PEG ，oligo-PEG 和no n- PEG 蛋白。在保持较高载量的同时能一步将修饰 后各种杂质去除。高分辨率的凝胶过滤介质suerdex 75 ， superdex 200 常用于精细纯化和鉴定PEG 化蛋白。 一、PEG 化蛋白纯化的通用工艺 发酵 细胞收集 捕获 精细纯化 中度纯化 病毒清除 图 2 ：A ) 用 Mac roCa pS P 分 离 PEG 修 饰 的 细 胞 色 素 C ，B) 用 superdex200 分析多修饰，单修饰和为修饰的蛋白。 纯蛋白 PEG 化学修饰 PEG 蛋白的纯化 PEG-BSA 的纯化 图1 ：PEG 化蛋白通用纯化工艺。 用MacroCap Q 一步纯化PEG-BSA ，将它与non-PEG-BSA PEG-Cytochrome C 的纯化 和反应副产物进行分离，纯度达到95% ，回收率达到 MacroCap SP 对于monoPEG 细胞色素c 的动态载量达到 85% ，载量1mg/ml。 3.8mg/ml ，通过凝胶过滤superdex 200 5/ 150GL 的分析， 柱子： Tricorn 5/ 100 装填MacroCap Q monoPEG 化蛋白的回收率达到99% ，纯度达到93%。 样品： 用30 000 Mr PEG 修饰BSA 上样量： 1 mg total protein per mL medium 柱子： Tricorn ™ 5/ 100 装填MacroCap SP Buffer A ：20 mM phosphate buffer, pH 7.0 样品： Cytochrome C modified with 20 000 Mr PEG Buffer B ：Buffer A + 500 mMNaCl, pH 7.0 上样： 6 mg total protein per ml medium Buffer A ：0.02 M sodium phosphate, pH 6.8 Buffer B ：Buffer A + 0.4 M sodium chloride 咨询热线：800-810-9118 400-810-9118 网址： 45 层析介质应用 A) 柱子： Tricorn 5/ 100 packed with 2 ml of MacroCap SP 样品： PEG40 avidin protein mixture ，15 mg of protein/ml medium