LAMP技术在中药材掺假检测方面的应用.doc

LAMP技术在中药材掺假检测方面的应用 　　摘要：针对日益严重的中药材掺假事件，对环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）技术在中药材掺假检测方面的应用进行研究，旨在为中药掺假检测中LAMP技术更广泛、更深入的应用提供一定的帮助 关键词：LAMP；中药材；掺假；检测；应用 中图分类号： R282.5 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2016.09.053 “一物有谬，便性命及之”，药材真伪不仅关乎治疗效果，而且还关乎患者生命[1]。由于中药材掺假事件频发，药材安全问题日益严重[2]，而传统中药材掺假检测方法，如性状鉴别、分光光度法、色谱法等，已无法满足检测的要求。近20年间，国内外学者一起致力于运用生物技术对中药进行研究，尤其是分子标记技术在中药鉴定中的应用是目前最令人鼓舞的进展之一[3]。本文针对LAMP技术在中药材掺假检测方面的应用进行研究，旨在为LAMP技术在中药材掺假检测中更好的应用提供一定的帮助 1 LAMP技术介绍 LAMP技术是Notomi等在2000年建立的一种新的体外扩增特异DNA片段的分子生物学技术[4]，在65℃恒温条件下几十分钟即可完成核酸扩增 2 LAMP技术在中药材掺假检测方面的应用 2.1用于人参掺假检测 人参在《神农本草经》中被列为上品，具有大补元气、强心固脱、安神生津的功效，自古以来，价格较昂贵，因而出现了许多伪品[5]。明代李时珍对沙参、荠尼乱人参析之颇详，足见人参伪品古亦有多种 赵源等[6]以线粒体基因 nad1为靶基因设计特异性引物，建立了人参的LAMP检测方法，能够在1小时内完成检测，灵敏度比常规PCR 高10倍，经验证能够区分人参及其近缘种，以及人参制品及其常见伪品 2.2用于冬虫夏草掺假检测 冬虫夏草一直被列为滋补品之首，并有“东方传奇式珍宝”之美誉[7]。市场上常见的混淆品为有凉山虫草、蛹草、分枝虫草等 李奎等[8]将包括冬虫夏草在内的6种不同虫草进行LAMP扩增，建立了冬虫夏草的环介导等温扩增快速检测方法 2.3用于金银花掺假检测 山银花等与金银花的原植物是近缘种，性状特征与金银花相似，当金银花价格升高时，部分商家常以山银花充当金银花进行销售，谋取利润[9] 蒋超[10] 建立了快速、简便、现场化的金银花分子鉴别方法，当温度为65℃时，能鉴别金银花与其同时伪品，解决了金银花分子鉴别中操作复杂，检测时间长的问题 2.4 用于钩吻掺假检测 钩吻是马钱科植物葫蔓藤的全草，又名断肠草、野葛、毒根、大茶药等，由于有剧毒，民间一直以外用为主，忌内服，多为捣碎或研磨后调敷患处，也可以煎水洗或烟熏，具有祛风散寮、消肿止痛、攻毒杀虫的功能[11] 余淑琳[12]等采用改良CTAB法提取钩吻、金银花和山银花的总DNA，利用PCR反应对psbA-trnH和trnL-trnF序列进行扩增，设计钩吻LAMP引物，从而成功鉴别出钩吻和金银花类药材及其水提液 3 LAMP技术的优点 在中药材掺假检测方面， LAMP技术具有较强的特异性、较高的灵敏度和较快的检测速度。赵源等[6]建立的人参的LAMP检测方法，能够在60分钟内完成检测。综合各文献数据，可得出结论：LAMP技术用于中药材鉴定领域的基本反应可以在60～90 分钟内完成，如果加入环引物，则能使反应时间缩短为30～45分钟。李奎等[8]建立的冬虫夏草的环介导等温扩增快速检测方法，LAMP最低检出限达6 pg/mL。综合各文献数据，可得出结论：与PCR鉴定方法相比，LAMP鉴定灵敏度通常是常规PCR的10～100倍。LAMP检测不需要复杂的仪器设备，检测现场只需配一台普通的水浴锅，就可以完成中药材的掺假检测，对于农村、基层非常适用 4 结语 LAMP检测技术适用于进行中药材掺假的实时定性检测。相信随着LAMP检测技术的发展和研究的深入，在未来，它必将在中药材掺假检测方面有更好的应用，也必将推动中药材掺假检测技术朝着更便捷、更廉价、更准确的方向发展 参考文献 [1]蒋超，黄璐琦， 袁媛，等. 金银花中几种分子的真伪鉴别方法比较及其研究进展[J].世界科学技术―中医药现代化，2014，16（08）：1831-1837. [2]瘳保生，宋经元，谢彩香，等.道地药材产地溯源研究[J].中国中药杂志，2014，39（20）：3881-3888. [3]黄璐琦，袁媛，袁庆军，等. 中药分子鉴定发展中的若干问题探讨[J].中国中药杂志，2014，39（19）：3663-3667. [4]何晓华，顿玉慧，卢力，等.环介导等温扩增技术