母乳抗肿瘤.ppt

母乳中的HAMLET对肿瘤和细菌的抑制 六安人乳库 2012年3月 HAMLET：人α-乳白蛋白分子部分展开后与油酸结合形成的复合物 HAMLET在体外能诱导各类癌细胞凋亡，包括肺癌、咽喉癌、肾癌、结肠癌、膀胱癌、前列腺癌和卵巢癌，以及黑色素瘤、脑胶质母细胞瘤和白血病。 但是对正常细胞没有任何毒性。 形成HAMLET需要以下条件：在母乳喂养儿童的胃内，在低pH值环境中打开蛋白质分子释放出钙，以及对酸敏感的脂肪酶水解母乳中的甘油三酸酯释放出油酸。 HAMLET的制备方法 提纯：人乳乳清液用硫酸铵沉淀，析出乳白蛋白，然后进行苯基-琼脂糖和体积排阻层析（层析柱为琼脂糖G-50），蛋白液的纯度通过SDS、琼脂糖凝胶电泳和光谱技术进行分析 脱钙：将25mg提纯得到的α- 乳白蛋白溶于1.8mM Tris-HCl溶液中，加入3.5mM的EDTA以移除Ca离子，蛋白分子构象的变化通过近紫外光普和ANS（8-苯胺基-1-萘磺酸铵盐）荧光光谱检测 离子交换层析：将10mg亚油酸溶于0.5ml 99.5%的乙醇中，超声波处理3分钟，之后加入10ml 10mM Tris-HCl，注入用DEAE-Trisacryl M（一种层析柱填料，法国BioSepra公司）装填的层析柱（14 cm×1.6 cm)，连接到生物逻辑层析系统（BioRad公司）中，用NaCl进行梯度洗脱（洗脱液A：10mM Tris-HCl，pH8.5；洗脱液B：含有1M NaCl的洗脱液A）。蛋白洗脱液透析脱盐，至少更换4次蒸馏水。最后将透析液冻干，得到α-乳白蛋白 人乳对肺部癌细胞的抑制（体外） 人乳对肺部癌细胞的抑制（体外） HAMLET对皮肤乳头状瘤的抑制 HAMLE对膀胱癌的抑制 HAMLE对膀胱癌的抑制 HAMLE对膀胱癌的抑制 HAMLET对膀胱癌的抑制 HAMLE对膀胱癌的抑制 HAMLET对胶质母瘤细胞的抑制 HAMLET对肿瘤细胞的抑制 母乳抑制白血病细胞和肺炎链球菌 母乳抑制白血病细胞和肺炎链球菌 母乳抑制流感嗜血杆菌 * * ——摘自《HAMLET Kills Tumor Cells by Apoptosis Structure, Cellular Mechanisms, and Therapy》 The Journal of Nutrition 2005, 135: 1299–1303 瑞典 兰德大学；挪威 Haukeland大学医院 ——摘自《Conversion of a-lactalbumin to a protein inducing apoptosis》 PNAS 2000, 97(8): 4221-4226 瑞典兰德大学 0 0 人MAL —— 98 人乳铁蛋白 75 86 鸡溶菌酶 69 87 人溶菌酶 82 93 牛α- 乳白蛋白 80 92 人α- 乳白蛋白 64 100 牛乳 2 4 人乳3# 1 2 人乳2# 0 2 人乳1# 100 92 对照组 癌细胞存活率（染色法2） 癌细胞存活率（染色法1） ——摘自《Apoptosis induced by a human milk protein》, Proc. Natl. Acad. Sci., 1995, 92: 8064-8068 瑞典 兰德大学；卡罗林斯卡学院 MAL： 用离子交换柱处理过的多聚体α- 乳白蛋白 可见：人乳及结合了钙离子的多聚体α- 乳白蛋白具有明显的抑制癌细胞生长的功能 MDCK（一种肾癌细胞株）暴露于人乳中产生的凋亡（人乳1:10稀释，24小时） A 对照样 B 实验样 皮肤乳头状瘤是作为研究人体环境（0.9%NaCl）中HAMLET 功效的第一个模型。 ——摘自《HAMLET Kills Tumor Cells by Apoptosis: Structure, Cellular Mechanisms, and Therapy》 Journal of Nutrition. 2005, 135: 1299–1303 瑞典 兰德大学； 挪威 Haukeland大学医院 HAMLET对皮肤乳头状瘤的抑制 ——摘自《Treatment of skin papillomas with topical alpha-lactalbumin-oleic acid 》，The New England journal of medicine 2004, 350(26): 2663-2672 瑞典 兰德大学 图中第1列（A、D、G）为3位患者治疗前的病灶； 图中第2列（B、E、H）为3位患者接受HAMLET治疗后3周时的病灶； 图中第3列（ C、F、I）为3位患者接受HA