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Page 1 of 5 陈译Lipofectamine TM 2000 使用说明书 陈译 LipofectamineTM 2000 使用说明书 产品特点 Lipofectamine 2000 转染真核细胞具有以下优点：  对多种细胞和培养器皿具有很高的转染效率，成功转染的细胞系 见 Cell Lines数据库。  核酸-Lipofectamine 2000 复合物（转染液）可直接加入细胞培养基中，不管 培养基是否含有血清。  转染后不必去除转染液，或者改变或添加培养基，但转染4-6 小时后可去除 转染液。 注意事项  推荐在混合前使用 Opti-MEM I 低血清培养基(Cat. No. 31985-062) 稀释 Lipofectamine 2000 和核酸。  转染过程中勿向培养基中添加抗生素，以免造成细胞死亡。  不同批实验请保持细胞接种条件相同。  请检测无血清培养基与 Lipofectamine 2000 的兼容性，因为一些无血清培养 基（如CD293, SFM II, VP-SFM 等）可能抑制阳离子脂质体介导的转染。 Page 2 of 5 陈译Lipofectamine TM 2000 使用说明书 脂质体RNAi 或siRNA 转染 下列步骤适用于 24 孔板培养的哺乳动物细胞，至于其他培养材料，请参考 转染规模调整，所有数量和体积均是按每孔计算。 1. 转染前一日，将细胞接种于500 μl 不含抗生素的培养基中，使其在转染时长 至30-50%融合。 2. 转染液制备，每孔细胞用量如下： A. 用50 μl Opti-ME I 低血清培养基（或者其他无血清培养基）稀释20 pmol siRNA （转染时siRNA 终浓度为33 nM ），轻轻混匀。 B. 使用前轻轻摇匀Lipofectamine 2000，然后取1 μl Lipofectamine 2000 在 50 μl Opti-ME I 培养基中稀释，室温孵育5 分钟。注意：请在25 分钟内 进行下一步操作。 C. 将前两步所稀释的DNA 和Lipofectamine 2000 混合（使总体积为100 μl）， 轻轻混匀，室温放置20 分钟（溶液可出现浑浊）。 3. 在每孔细胞中加入100 μl 转染液，轻轻摇匀。 37℃培养24-96 小时后检测基因表达，转染4-6 小时后可更换培养基。 脂质体siRNA 转染优化 可调整siRNA 与Lipofectamine 2000 的用量以优化转染，在24 孔板，siRNA 可在10-50 pmol 之间调整，Lipofectamine 2000 可在0.5-1.5 μl 之间调整，在增加 细胞密度时也应优化转染剂量。更多RNAi 转染技巧可参考《成功RNAi 七步法》 （/rnai ）。 Page 3 of 5 陈译Lipofectamine TM 2000 使用说明书 脂质体DNA 转染 下列步骤适用于24 孔板培养的哺乳动物细胞，至于其他培养材料，请参考转 染规模调整，所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的DNA （μg ） 与Lipofectamin 2000 （μl）的比值为1:2 到1:3，转染高密度细胞可获得高转染效 率、高表达水平和低细胞毒性。优化转染是必需的（见优化脂粒DNA 转染）。 1．贴壁细胞：转染前一天每孔0.5-2 ×105 个细胞接种于500 μl 不含抗生素的培 养基中，在转染时细胞可长至90-95