PTLC和柱色谱.ppt

* * 浅谈（硅胶）制备型薄层色谱与（硅胶）柱色谱的操作问题 ——结合我们实验室中具体操作 一般我们实验中应用最多的是以硅胶 吸附剂为固定相的薄层色谱和柱色谱。 虽然很多化学实验书中都叙述了（硅 胶）制备型薄层色谱与（硅胶）柱色谱的操作技术的实验方法，但大多数都是比较雷同地泛泛地描述，而且有些描述在实验室中并不适用。例如，很多书中都提到装柱时先在底层铺一层石英砂，加入固定相后再在顶部铺一层石英砂。比较繁琐，而且效果“？”，在实验室中不适用。 吸附色谱的原理： 吸附色谱是根据物质在硅胶上的吸附 力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附， 整个过程即是吸附、 解吸、 再吸附、 再解吸过程。 第一部分（硅胶）制备型薄层色谱(PTLC) 一、制板操作 二、点样操作 三、回收分离组分 四、常见问题及注意事项 第二部分（硅胶）柱色谱的操作问题 一、装柱 二、上样 三、洗脱剂的使用 四、洗脱的技巧 第一部分（硅胶）制备型薄层色谱(PTLC) 一、制板操作： 我们实验室常用的制板操作（手工制备硅胶硬板）： 1. 溶解制备0.5%CMC-Na溶液 (为何用0.5%CMC-Na溶液？) ? 先说一下CMC-Na （1）.结构: （2）物理和化学性质： 纤维素羧甲基醚的钠盐，为白色或乳白色纤维状粉末或颗粒，几乎无味，具吸湿性。 易于分散在水中成透明胶状溶液，在乙醇等有机溶剂中不溶。1%水溶液pH为6.5～8.5，当pH10或5时，胶浆粘度显著降低，在pH=7时性能最佳。 对热稳定，在20℃以下粘度迅速上升，45℃时变化较慢，80℃以上长时间加热可使其胶体变性而粘度和性能明显下降。 在碱性溶液中很稳定，遇酸则易水解，pH值为2-3时会出现沉淀，遇多价金属盐也会反应出现沉淀。 作用是做粘合剂。其他粘合剂：煅石膏、淀粉等。 0.5%CMC-Na溶液制备过程： 例如，取蒸馏水1000ml，加热煮沸?，将羧甲基纤维素钠5g分次撒入沸水中，玻璃棒搅拌，直到完全溶解。煮沸前加少量水补蒸发量。 为何分次加入CMC-Na？ 2.硅胶粘合 取一定量硅胶放入研钵中，加入3倍量的0.5%CMC-Na溶液，向同一方向研磨至无气泡，粘液成线状即可。 为什么要同一方向？ 3.铺板 适宜的薄层吸附剂的厚度为0.5-2mm，板的尺寸一般为20cm×20cm大约需要硅胶的量为30克（经验值），所以PTLC常用来分离毫克级的样品。 二、点样操作 上样是PTLC分离的一个最关键的步骤。薄层板最好先用甲醇展开一次，以减少杂质的混入。 上样前将样品用挥发性的溶剂溶解，浓度应在5%-10%左右，点样带应尽量窄，以获得较好的分离效果。 一般来讲，一块1mm厚的20cm×20cm的硅胶薄层板可分离10-100mg的样品，如果厚度加倍，可多上样50%。 三、回收分离组分 PTLC展开结束后，有紫外吸收的化合物，可以在紫外灯下确认色带位置； 无紫外吸收的化合物，可采用在板上面覆盖一块玻璃板，然后在板的边缘喷洒显色剂来确认色带的位置。 确定各组分色带的位置后，用刮刀将该色带从板上刮下，然后用极性尽量低（极性越高，往往被提出的杂质的量就越大）、对该化合物溶解度好的溶剂洗脱，过滤除去吸附剂，收集洗脱液，回收溶剂，即可。 甲醇可溶解硅胶及其中含有的一些杂质，因此，并不适合用来洗脱，较合适的溶剂是丙酮、乙醇或氯仿。 四、常见问题及注意事项 1.板子裂口可能的原因： （1）硅胶的比例太大 （2）板子未自然干透，就在烘箱中活化 （可用低温大约40度左右烘30分钟左右再用进行活化） （3）CMC-Na中有絮状沉淀所致。   2.活化问题： 活化的目的是除去水分，自然晾干后，再在105~110℃活化，活化时间为0.5~1小时，冷却后即可使用。厚板在活化时容易裂，可以降低活化温度，自然晾干